目的使用3种不同方法制备富血小板血浆(PRP),通过观察所得产物对脂肪干细胞(ADSCs)细胞增殖和成骨分化能力的影响,为PRP和ADSCs复合材料的应用提供理论基础。方法分别使用传统的二次离心法、三次离心法以及Tubex改良法制备PRP,运用血小板计数比较3种方法制备PRP的血小板采集率的大小;采用酶消化组织块法分离培养细胞并通过流式细胞术、成骨分化实验和成脂分化实验鉴定细胞;将5%浓度的PRP和ADSCs共培养,通过CCK-8法观察其对细胞增殖能力的影响;茜素红染色、碱性磷酸酶染色定量和RT-PCR方法观察其对细胞成骨分化能力的影响。结果血小板计数结果表明Tubex改良法制备的PRP血小板回收率明显高于其他两组;实验中获得的细胞表面特定抗原的表达具备成骨分化和成脂分化能力;ADSCs在培养21 d后,所有PRP处理组的ADSCs有矿化结节的形成,碱性磷酸酶活性也明显高于矿化诱导液处理组(P<0.05),RTPCR结果表明PRP处理细胞成骨分化标记基因的表达也明显高于矿化诱导组(P<0.05),Tubex法制备的PRP对ADSCs成骨分化的促进作用显著强于其他两种方法 (P<0.05)。结论 Tubex法制备PRP血小板回收率均要高于二次离心法和三次离心法,其对兔ADSCs的增殖、成骨分化的促进作用优于其他两种方法。通过Tubex密闭装置制备PRP,不仅操作简单,而且能够提高血小板的采集率,其内丰富的细胞因子有利于ADSCs的增殖和分化。