【摘 要】
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目的体外观察环孢素A(Cs A)抑制软骨细胞线粒体自噬后对骨关节炎(OA)相关蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达的影响。方法分离、培养临床上诊断为OA
【机 构】
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安徽医科大学第四附属医院骨科,安徽医科大学附属安徽省立医院骨科,安徽医科大学第一附属医院骨科
【基金项目】
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国家自然科学基金（编号：81171173）, 安徽医科大学校科学研究基金（编号：2015xkj042）
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目的体外观察环孢素A(Cs A)抑制软骨细胞线粒体自噬后对骨关节炎(OA)相关蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达的影响。方法分离、培养临床上诊断为OA患者的膝关节软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色法对软骨细胞进行鉴定。以白介素-1β(IL-1β)刺激软骨细胞及Cs A抑制线粒体自噬,分为只加培养基的空白对照组、混有IL-1β的培养基组、混有IL-1β+Cs A的培养基组。用Mitotracker Deep Red(MTR)标记线粒体与Lysotracker green(LTG)标记自噬体的免疫荧光共定位以及Tom20蛋白表达量检测线粒体自噬水平;用Real-time PCR和Western blot法分别检测软骨细胞中MMP-1、MMP-13的mRNA和蛋白的表达。结果 IL-1β组较对照组MTR和LTG荧光共定位增加,线粒体外膜蛋白Tom20表达降低(P<0.05),线粒体自噬增加,MMP-1、MMP-13的mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。与IL-1β组相比,IL-1β+Cs A组MTR和LTG荧光共定位减少,Tom20蛋白表达增加(P<0.05),线粒体自噬减少,MMP-1、MMP-13的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。结论在体外Cs A可以抑制软骨细胞线粒体自噬,抑制线粒体自噬使OA相关蛋白MMP-1和MMP-13的表达增加。
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