目的 观察磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3 K/Akt）通路在电烧伤大鼠血清诱导的单核细胞中的变化,探讨其在单核细胞与血管内皮细胞黏附中的作用. 方法 取64只清洁级SD大鼠制作电烧伤模型,制备电烧伤大鼠血清;取24只大鼠不作处理,制备正常大鼠血清.（1）常规培养人单核细胞株THP-1细胞,按照随机数字表法将对数生长期细胞分为正常血清组（将细胞重新悬浮于含体积分数20％正常大鼠血清的RPMI 1640培养液中）和烧伤血清组（将细胞重新悬浮于含体积分数20％电烧伤大鼠血清的RPMI 1640培养液中）,每组设6个复孔.正常血清组于培养24 h,烧伤血清组于培养3、6、24 h,观察THP-1细胞形态,双抗体夹心ELISA法测定2组细胞上清液中TNF-α含量.2组均于培养3、6、24 h收集细胞,蛋白质印迹法检测Akt活化状态.（2）另取THP-1细胞按照随机数字表法分为4组：正常血清组、烧伤血清组,2组各自培养方法同前;正常血清＋阻断剂组、烧伤血清＋阻断剂组,在正常血清组、烧伤血清组的培养液中加入渥曼青霉素100 nmol/L,余培养方法同前.每组设6个复孔.取培养3、6h的THP-1细胞,加入单层人血管内皮细胞株EA.hy926细胞,行单核-内皮细胞黏附检测.对数据行单因素方差分析、LSD-￡检验. 结果 （1）正常血清组培养24 h,THP-1细胞呈悬浮生长、形态一致.烧伤血清组培养3h,细胞膜完整,细胞形态不规则;培养6h细胞大小不一,细胞膜与细胞质膨胀;培养24 h细胞膜破裂,细胞死亡.正常血清组培养24 h和烧伤血清组培养3、6、24 h,THP-1细胞上清液中TNF-α含量分别为（38.5±1.4）、（75.1±1.5）、（91.5±1.8）、（117.0±1.4）pg/mL,总体比较差异明显（F=1 415.306,P＜0.01）.烧伤血清组培养3、6、24 h THP-1细胞上清液中TNF-α含量均明显高于正常血清组培养24 h（￡值分别为29.614、42.852、63.485,P值均小于0.01）.烧伤血清组培养3、6、24 h,THP-1细胞中磷酸化蛋白激酶B/Akt比值分别是正常血清组培养同时相点的2.66、3.69、1.17倍.（2）正常血清组、正常血清＋阻断剂组、烧伤血清组、烧伤血清＋阻断剂组培养3、6h,每100倍视野下黏附EA.hy926细胞的THP-1细胞数量分别为（231 ±45）、（280 ±47）、（703±169）、（335±85）个,（219±49）、（235±21）、（562±123）、（226±29）个,总体比较均差异明显（F值分别为25.630、18.975,P值均小于0.01）.与正常血清组比较,烧伤血清组黏附EA.hy926细胞的THP-1细胞数在培养3、6h均明显增多（￡值分别为6.189、6.601,P值均小于0.01）;烧伤血清＋阻断剂组黏附EA.hy926细胞的THP-1细胞数在培养3、6h较烧伤血清组均明显减少（t值分别为6.821、6.465,P值均小于0.01）. 结论 电烧伤大鼠血清可诱导单核细胞分泌TNF-α,促进单核-内皮细胞黏附.而阻断PI3K/Akt信号通路,可有效抑制单核-内皮细胞的黏附.
磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B通路在电烧伤大鼠血清诱导单核-内皮细胞黏附中的作用
【摘 要】
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目的 观察磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3 K/Akt）通路在电烧伤大鼠血清诱导的单核细胞中的变化,探讨其在单核细胞与血管内皮细胞黏附中的作用. 方法 取64只清洁级SD大鼠制作电烧伤模型,制备电烧伤大鼠血清;取24只大鼠不作处理,制备正常大鼠血清.（1）常规培养人单核细胞株THP-1细胞,按照随机数字表法将对数生长期细胞分为正常血清组（将细胞重新悬浮于含体积分数20％正常大鼠血清的RPMI
【机 构】
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武汉大学同仁医院暨武汉市第三医院烧伤研究所,430060,武汉大学同仁医院暨武汉市第三医院烧伤研究所,430060,武汉大学同仁医院暨武汉市第三医院烧伤研究所,430060,武汉大学同仁医院暨武汉市第
【发表日期】
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2014年30期
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