【摘 要】
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目的:通过探讨用于流式分选的T细胞体外扩增的无血清培养基,提高过继细胞的增殖能力和活性.方法:采用人外周血淋巴细胞分离管制备外周血单个核细胞,再用流式细胞分选仪从6例健康志愿者的外周血单个核细胞中分选CD3+T细胞到4种常用的培养基中:X-VIVO 15、KBM581、TexMACSGMP和10％FBS/1640,观察并记录培养细胞的状态和体外增殖能力.于第3天,第6天和第8天,通过胎盼蓝染色后进行活细胞计数.于第8天用凋亡试剂盒检测扩增细胞的凋亡情况,并用流式细胞分析仪检测细胞的免疫表型.结果:X-VI
【机 构】
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上海市公共卫生临床中心生物治疗中心 上海201508;上海市公共卫生临床中心科学研究部 上海201508
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目的:通过探讨用于流式分选的T细胞体外扩增的无血清培养基,提高过继细胞的增殖能力和活性.方法:采用人外周血淋巴细胞分离管制备外周血单个核细胞,再用流式细胞分选仪从6例健康志愿者的外周血单个核细胞中分选CD3+T细胞到4种常用的培养基中:X-VIVO 15、KBM581、TexMACSGMP和10％FBS/1640,观察并记录培养细胞的状态和体外增殖能力.于第3天,第6天和第8天,通过胎盼蓝染色后进行活细胞计数.于第8天用凋亡试剂盒检测扩增细胞的凋亡情况,并用流式细胞分析仪检测细胞的免疫表型.结果:X-VIVO 15、TexMACS GMP和10％FBS/1640作为流式细胞分选的接收液仅少量细胞碎片,而分选在KBM581的细胞大量死亡,显著高于X-VIVO 15组(P＜0.05).X-VIVO 15中扩增的细胞数量最多,增殖检测结果显示活细胞在X-VIVO 15中快速增殖且细胞凋亡率显著低于KBM 581和TexMACS GMP(P＜0.05).4种培养基扩增的细胞主要呈现效应记忆型.其中,X-VIVO15中效应记忆型T细胞比例显著高于TexMACSGMP(P＜0.05).TexMACS中效应细胞比例显著高于10％FBS/1640(P＜0.05).结论:X-VIVO 15无血清培养基扩增流式分选的T细胞具有高增殖能力、细胞活性和记忆表型,适用于经流式分选后细胞的体外扩增.
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