【摘 要】
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取本实验室前期分离鉴定的1株非致病性血清1型禽腺病毒(FAdV-1)JS2017株,在LMH细胞扩大培养后提取病毒全基因组DNA,PCR分别扩增基因组左端1186 bp和右端1130 bp序列作为同源臂并克隆进质粒SuperCos-1内,成功构建了质粒pCos-UD.质粒pCos-UD线性化后与病毒全基因组DNA共转化入大肠杆菌BJ5183内,通过同源序列间发生同源重组,将完整病毒基因组DNA插入质粒载体中成功构建感染性克隆pCos-FAdV1.分别针对病毒基因组不同部位设计引物进行PCR检测,同时配合限
【机 构】
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扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病预防控制协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫
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取本实验室前期分离鉴定的1株非致病性血清1型禽腺病毒(FAdV-1)JS2017株,在LMH细胞扩大培养后提取病毒全基因组DNA,PCR分别扩增基因组左端1186 bp和右端1130 bp序列作为同源臂并克隆进质粒SuperCos-1内,成功构建了质粒pCos-UD.质粒pCos-UD线性化后与病毒全基因组DNA共转化入大肠杆菌BJ5183内,通过同源序列间发生同源重组,将完整病毒基因组DNA插入质粒载体中成功构建感染性克隆pCos-FAdV1.分别针对病毒基因组不同部位设计引物进行PCR检测,同时配合限制性内切酶酶切图谱分析确认感染性克隆中已插入完整的病毒基因组序列.通过Asc Ⅰ酶切,从感染性克隆载体中释放完整FAdV-1基因组DNA片段,利用脂质体转染试剂转染入LMH细胞内,成功拯救出病毒cFAdV-1,病毒生长曲线的测定结果显示拯救病毒与亲本病毒JS2017株具有相似的复制能力.本研究中所构建的FAdV-1感染性克隆为进一步开发以FAdV-1为载体的禽用基因工程疫苗提供反向遗传操作技术平台.
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