论文部分内容阅读
【摘要】目的：探讨分析免疫组化染色和特殊染色对显示幽门螺杆菌的检验情况。方法：2018年1至2021年1月收集本院60例幽门螺杆菌感染患者，所有患者均取病理活检，对组织进行免疫组化染色和特殊染色，分析两种方法的幽门螺杆菌阳性率、灵敏度和特异性。结果：相比特殊染色，免疫组化染色幽门螺杆菌阳性率高（P<0.05），灵敏度和特异性高（P<0.05）。结论：相比特殊染色，免疫组化染色显示幽门螺杆菌的检验的效果更佳，阳性率高，漏诊率低，灵敏度和特异性高，具有临床价值。
【关键词】特殊染色；免疫组化染色；幽门螺杆菌；灵敏度；特异性
【中图分类号】R446.【文献标识码】A.【文章编号】2096-5249（2021）14-0151-02
幽门螺杆菌（HP）是一种生长条件严格的螺旋状微厌氧菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检中分离出来，是唯一能在人胃中存活的微生物种类[1]。在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，幽门螺杆菌被列入Ⅰ类致癌物清单[2]。研究指出，幽门螺杆菌生活在人体胃的幽门部分，是最常见的细菌病原体之一，5岁以下的感染率高达50%[3]。这种细菌感染首先引起慢性胃炎，进而導致胃溃疡和胃萎缩。在严重的情况下，它会发展成胃癌。据统计，首先感染幽门螺杆菌的人群，萎缩性胃炎和胃癌的发病率较高[4]。幽门螺杆菌感染与胃癌的死亡率是平行的。幽门螺杆菌寄生于胃黏膜，67%～80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺杆菌引起的[5]。因此对于幽门螺杆菌的检测是必要的，诊断幽门螺杆菌感染的方法很多，如活检、幽门螺杆菌分离培养、快速尿素酶试验、尿素呼气试验、尿氨排泄试验、血清学试验、组织活检等。本研究分析比较免疫组化染色和特殊染色对显示幽门螺杆菌的检验情况。
1？对象与方法
1.1.研究对象
2018年1月至2021年1月收集本院60例幽门螺杆菌感染患者，年龄41～78（60.24±3.64）岁，男37例，女23例。
纳入标准：均经过培养法确定为幽门螺杆菌感染患者；对本研究知情同意并自愿参与的患者。
排除标准：其他病原菌感染性疾病。
1.2.方法
病理活检。检查前，患者应禁食禁水。胃镜管应从患者的食道插入患者的胃部，在胃镜观察下，用活检钳从病灶处取出组织，并确保组织上无血、黏液等。如果有血液、污垢、黏液等，可以用水清洗。
石蜡切片。取出组织后，用10%甲醛固定，保证新鲜。将石蜡在80%、90%、95%和100%酒精中浸泡2 h，以置换组织中的透明剂。石蜡包埋的组织被放置在熔化的固体石蜡中。石蜡凝固后，将组织包裹在其中。石蜡块被修剪和切片。切片机用于切片。石蜡切片的厚度一般为4～6 μm。用眼科镊子提起蜡带，在40～45 ℃的水面上轻轻展开。轻微起皱的蜡带会因水的张力和温度而自然平滑。切片在恒温水面上完全压平后，将蜡片捞到切片中部，倒出切片上的残留水分，放入60～65 ℃的恒温烘箱中烘烤。切片漂白干燥温控器烘箱15～30 min ，去除溶解组织间隙中的石蜡。
免疫组化，石蜡切片60 ℃烘烤30 min。石蜡切片常规二甲苯脱蜡 Ⅰ 从二甲苯Ⅱ到无水乙醇过程如下：无水乙醇Ⅱ-无水乙醇Ⅲ-95%乙醇-90%乙醇-80%乙醇-70%乙醇-蒸馏水洗涤并浸泡使用。抗原修复，将切片浸入装有0.01 M柠檬酸缓冲溶液（pH 6.0）的沸腾压力锅中，盖上盖子。添加压力阀后，切片继续加热至空气喷射。计数2 min 后，用自来水冲洗切片至室温。取出切片，用蒸馏水冲洗2次，每次3 min 0.01 mpbs溶液冲洗两次，除去l磷酸盐缓冲盐浴液（PBS）溶液，每片1滴（50 μL）与1滴羊血清孵育。血清被去除。X抗体1滴（50 μL），室温孵育后，每片加入1滴聚合物增强剂（A剂），每片加入1滴聚合物增强剂（B剂），3滴PBS每片加入溶液，每片加入2滴DAB溶液。结果在显微镜下观察。梯度酒精脱水为70%-80%-90%-100%Ι-100%II。脱色为二甲苯I-显微镜下观察结果。
特殊染色。吉姆萨染色为石蜡切片60 ℃烘烤30 min。石蜡切片常规脱蜡为二甲苯Ι从二甲苯II到无水乙醇Ι样品用胰蛋白酶处理；取适量吉姆萨染料溶液和磷酸盐缓冲液，按一定比例混合，即吉姆萨染料溶液，备用；浸在吉姆萨染色液中，干燥并在显微镜下检查。
1.3.观察指标
分析两种方法的幽门螺杆菌阳性率、灵敏度和特异性。
1.4.统计学处理
应用SPSS 20.0软件，计数资料采用[n（%）]表示，进行χ2检验，当P<0.05为组间数据差异显著。
2？结果
2.1.分析两种方法的幽门螺杆菌阳性率
相比特殊染色，免疫组化染色幽门螺杆菌阳性率高（P<0.05），见表1。
2.2.分析两种方法的灵敏度和特异性
相比特殊染色，免疫组化染色灵敏度和特异性高（P<0.05），见表2。
3？讨论
幽门螺杆菌是一种螺旋状、有鞭毛的微厌氧菌，主要生活在人胃的幽门黏膜中，它是唯一可以在人胃中存活的微生物物种[6]。幽门螺杆菌具有高度传染性，主要通过口腔口传播和粪口传播。在中国，发病率非常高，大约一半的人曾经感染过幽门螺杆菌[7]。幽门螺杆菌感染与胃肠道疾病的发生密切相关，如慢性胃炎、胃溃疡、胃癌等疾病。因此，对于幽门螺杆菌感染阳性的患者，应积极治疗，根治。幽门螺杆菌检查的主要方法有C14呼气试验、血液检查、胃镜活检等[8]。现在检测幽门螺杆菌的方法很多，分为侵入性和非侵入性。侵入性检查是对标本进行活检，主要包括胃镜下快速尿素酶试验。在检查中，完成胃镜检查后，在距幽门 5 cm 范围内取了一个小样本或黏液，并观察了胃的各个部位。这种黏液中可能含有幽门螺杆菌分泌的尿素酶，会使试剂尿素分解，使试剂呈玫瑰色。这可以是定性的，即有或没有，也可以是轻度、中度和重度，但不能是定量的[9]。在胃镜下，会取一些标本进行病理活检。有时在显微镜下，可以看到幽门螺杆菌。这也是一种重要的诊断方法，具有侵入性。无创的方法多是尿素呼气试验。尿素呼气试验分为C13和C14，即同位素分解，灭活周期不同，所以比较贵、但危害稍小。其次，在粪便中，可以发现一些与幽门螺杆菌有关的物质作为测试。第三是在血液中。可以提取针对幽门螺杆菌的抗体。 本研究中，相比特殊染色，免疫组化染色幽门螺杆菌阳性率高（P<0.05），灵敏度和特异性高（P<0.05）。究其原因，吉姆萨染色液由天蓝色和伊红组成，嗜酸性颗粒是碱性蛋白质和伊红的结合物，称为嗜酸性物质；核蛋白和淋巴细胞的细胞质呈酸性，与碱性染料亚甲蓝或天蓝色结合，染成紫蓝色，称为碱性物质[10]。然而，吉姆萨染色显示细胞和寄生虫的染色更好，结构更清晰，细胞质和中性颗粒的染色差[11]。免疫组化是病理诊断中常用的检查方法。当显微镜下无法确定细胞或组织的来源时，可加用免疫组化来确定肿瘤的来源和良恶性的区分。有时显微镜下可判断为癌细胞，但无法进一步明确病理分类，可通过免疫组化进一步确诊，如鳞癌、腺癌、小细胞癌等淋巴结活检时做完后，需要做免疫组化，确定原发部位，才能找到原发病灶。免疫组化也可作为恶性肿瘤诊断和鉴别诊断的重要依据，判断良性肿瘤时也需要检查免疫组化。免疫组化染色是免疫学中基于抗原与抗体特异性结合的反应原理，一般采用生物素标记抗体的方法来显示组织中的抗原，研究抗原的定位、定性和相对定量[12]。根据切片情况，我们选择是否加免疫组化。典型病例无须检查即可确诊，无须做免疫组化。如不能确诊，应进一步通过免疫组化确定肿瘤类型，以免影响患者的治疗。免疫组化染色是病理科的一种辅助检查方法。通常，当患者的疾病不是特别典型，或者疾病难以病理分类时，会采用免疫组化染色辅助诊断。免疫组化染色是利用已知抗体检测组织中未知抗原的抗原和抗体染色方法。组织中存在不同的抗原表型，每种疾病的蛋白表达可能不同。不同的抗体用于检测组织中不同的抗原，以指示组織来源的疾病，或通过蛋白质的表达对组织来源进行分类。
综上所述，相比特殊染色，免疫组化染色显示幽门螺杆菌的检验的效果更佳，阳性率高，漏诊率低，灵敏度和特异性高，具有临床价值。
参考文献
[1] 张淦梅.肿瘤病理诊断中特殊染色联合免疫组化技术的应用效果及检测阳性率评价[J].临床检验杂志（电子版），2019，8（4）：262-263.
[2] 马钰，刘屹，普彦淞，等.P504S，Ki-67对老年胃癌的早期诊断价值及与幽门螺旋杆菌的相关性研究[J].现代肿瘤医学，2020，301（19）：109-113.
[3] 贾坤，苏建荣.胃癌组织中IFN-γ，IL-4和SOX-2蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性分析[J].中国临床医学，2019，26（6）：900-904.
[4] 万维松，王乐，胡余昌，等.免疫组化染色与-（14）C尿素呼气试验在幽门螺杆菌相关胃炎诊断中的比较[J].临床与实验病理学杂志，2019，35（1）：51-54.
[5] 武才琪，王庆林，李盼，等.P53，PCNA，CA724，胃泌素17及幽门螺杆菌抗体联合检测在萎缩性胃炎与早期胃癌鉴别中的应用价值[J].中国微生态学杂志，2020，32（2）：72-76.
[6] 喻斌，曾孟晖，徐寅，等.肝胃百合汤对慢性应激与幽门螺杆菌双重损伤因素模型小鼠胃黏膜组织HSP70、NF-κB蛋白表达的影响[J].湖南中医药大学学报，2019，12（9）：1073-1078.
[7] 徐月娥，李淑湘，高鑫，等.苏州两所幼儿园儿童感染幽门螺杆菌的危险因素及口腔清洁措施对降低口腔幽门螺杆菌感染的作用[J].华西口腔医学杂志，2019，37（1）：70-75.
[8] 徐文敏，张海燕，何苗，等.幽门螺旋杆菌感染性胃癌组织中Cyclin D1、MMP-9的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2019，35（2）：213-215.
[9] 毛勇，王军，陈文燕.CCR3联合Cyclin D1在幽门螺旋杆菌感染所致胃癌及癌前病变中的诊断价值[J].甘肃科学学报，2020，148（6）：28-34.
[10] 姚莉，汤显斌，袁玲玲，等.硫酸亚铁特殊染色与免疫组织化学双重染色在黑色素肿瘤诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2020，49（5）：482-484.
[11] 张强，侯丹杰，陈广生，等.Calretinin，S100免疫组化染色及二者联合检测在新生儿先天性巨结肠诊断中的应用价值研究[J].现代消化及介入诊疗，2020，25（10）：99-102.
[12] 孙林雍，严嘉琦，陈昶，等.荧光定量PCR与抗酸特殊染色对疑似骨关节结核中结核分枝杆菌的检测对比[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（9）：101-103.
【关键词】特殊染色；免疫组化染色；幽门螺杆菌；灵敏度；特异性
【中图分类号】R446.【文献标识码】A.【文章编号】2096-5249（2021）14-0151-02
幽门螺杆菌（HP）是一种生长条件严格的螺旋状微厌氧菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检中分离出来，是唯一能在人胃中存活的微生物种类[1]。在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，幽门螺杆菌被列入Ⅰ类致癌物清单[2]。研究指出，幽门螺杆菌生活在人体胃的幽门部分，是最常见的细菌病原体之一，5岁以下的感染率高达50%[3]。这种细菌感染首先引起慢性胃炎，进而導致胃溃疡和胃萎缩。在严重的情况下，它会发展成胃癌。据统计，首先感染幽门螺杆菌的人群，萎缩性胃炎和胃癌的发病率较高[4]。幽门螺杆菌感染与胃癌的死亡率是平行的。幽门螺杆菌寄生于胃黏膜，67%～80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺杆菌引起的[5]。因此对于幽门螺杆菌的检测是必要的，诊断幽门螺杆菌感染的方法很多，如活检、幽门螺杆菌分离培养、快速尿素酶试验、尿素呼气试验、尿氨排泄试验、血清学试验、组织活检等。本研究分析比较免疫组化染色和特殊染色对显示幽门螺杆菌的检验情况。
1？对象与方法
1.1.研究对象
2018年1月至2021年1月收集本院60例幽门螺杆菌感染患者，年龄41～78（60.24±3.64）岁，男37例，女23例。
纳入标准：均经过培养法确定为幽门螺杆菌感染患者；对本研究知情同意并自愿参与的患者。
排除标准：其他病原菌感染性疾病。
1.2.方法
病理活检。检查前，患者应禁食禁水。胃镜管应从患者的食道插入患者的胃部，在胃镜观察下，用活检钳从病灶处取出组织，并确保组织上无血、黏液等。如果有血液、污垢、黏液等，可以用水清洗。
石蜡切片。取出组织后，用10%甲醛固定，保证新鲜。将石蜡在80%、90%、95%和100%酒精中浸泡2 h，以置换组织中的透明剂。石蜡包埋的组织被放置在熔化的固体石蜡中。石蜡凝固后，将组织包裹在其中。石蜡块被修剪和切片。切片机用于切片。石蜡切片的厚度一般为4～6 μm。用眼科镊子提起蜡带，在40～45 ℃的水面上轻轻展开。轻微起皱的蜡带会因水的张力和温度而自然平滑。切片在恒温水面上完全压平后，将蜡片捞到切片中部，倒出切片上的残留水分，放入60～65 ℃的恒温烘箱中烘烤。切片漂白干燥温控器烘箱15～30 min ，去除溶解组织间隙中的石蜡。
免疫组化，石蜡切片60 ℃烘烤30 min。石蜡切片常规二甲苯脱蜡 Ⅰ 从二甲苯Ⅱ到无水乙醇过程如下：无水乙醇Ⅱ-无水乙醇Ⅲ-95%乙醇-90%乙醇-80%乙醇-70%乙醇-蒸馏水洗涤并浸泡使用。抗原修复，将切片浸入装有0.01 M柠檬酸缓冲溶液（pH 6.0）的沸腾压力锅中，盖上盖子。添加压力阀后，切片继续加热至空气喷射。计数2 min 后，用自来水冲洗切片至室温。取出切片，用蒸馏水冲洗2次，每次3 min 0.01 mpbs溶液冲洗两次，除去l磷酸盐缓冲盐浴液（PBS）溶液，每片1滴（50 μL）与1滴羊血清孵育。血清被去除。X抗体1滴（50 μL），室温孵育后，每片加入1滴聚合物增强剂（A剂），每片加入1滴聚合物增强剂（B剂），3滴PBS每片加入溶液，每片加入2滴DAB溶液。结果在显微镜下观察。梯度酒精脱水为70%-80%-90%-100%Ι-100%II。脱色为二甲苯I-显微镜下观察结果。
特殊染色。吉姆萨染色为石蜡切片60 ℃烘烤30 min。石蜡切片常规脱蜡为二甲苯Ι从二甲苯II到无水乙醇Ι样品用胰蛋白酶处理；取适量吉姆萨染料溶液和磷酸盐缓冲液，按一定比例混合，即吉姆萨染料溶液，备用；浸在吉姆萨染色液中，干燥并在显微镜下检查。
1.3.观察指标
分析两种方法的幽门螺杆菌阳性率、灵敏度和特异性。
1.4.统计学处理
应用SPSS 20.0软件，计数资料采用[n（%）]表示，进行χ2检验，当P<0.05为组间数据差异显著。
2？结果
2.1.分析两种方法的幽门螺杆菌阳性率
相比特殊染色，免疫组化染色幽门螺杆菌阳性率高（P<0.05），见表1。
2.2.分析两种方法的灵敏度和特异性
相比特殊染色，免疫组化染色灵敏度和特异性高（P<0.05），见表2。
3？讨论
幽门螺杆菌是一种螺旋状、有鞭毛的微厌氧菌，主要生活在人胃的幽门黏膜中，它是唯一可以在人胃中存活的微生物物种[6]。幽门螺杆菌具有高度传染性，主要通过口腔口传播和粪口传播。在中国，发病率非常高，大约一半的人曾经感染过幽门螺杆菌[7]。幽门螺杆菌感染与胃肠道疾病的发生密切相关，如慢性胃炎、胃溃疡、胃癌等疾病。因此，对于幽门螺杆菌感染阳性的患者，应积极治疗，根治。幽门螺杆菌检查的主要方法有C14呼气试验、血液检查、胃镜活检等[8]。现在检测幽门螺杆菌的方法很多，分为侵入性和非侵入性。侵入性检查是对标本进行活检，主要包括胃镜下快速尿素酶试验。在检查中，完成胃镜检查后，在距幽门 5 cm 范围内取了一个小样本或黏液，并观察了胃的各个部位。这种黏液中可能含有幽门螺杆菌分泌的尿素酶，会使试剂尿素分解，使试剂呈玫瑰色。这可以是定性的，即有或没有，也可以是轻度、中度和重度，但不能是定量的[9]。在胃镜下，会取一些标本进行病理活检。有时在显微镜下，可以看到幽门螺杆菌。这也是一种重要的诊断方法，具有侵入性。无创的方法多是尿素呼气试验。尿素呼气试验分为C13和C14，即同位素分解，灭活周期不同，所以比较贵、但危害稍小。其次，在粪便中，可以发现一些与幽门螺杆菌有关的物质作为测试。第三是在血液中。可以提取针对幽门螺杆菌的抗体。 本研究中，相比特殊染色，免疫组化染色幽门螺杆菌阳性率高（P<0.05），灵敏度和特异性高（P<0.05）。究其原因，吉姆萨染色液由天蓝色和伊红组成，嗜酸性颗粒是碱性蛋白质和伊红的结合物，称为嗜酸性物质；核蛋白和淋巴细胞的细胞质呈酸性，与碱性染料亚甲蓝或天蓝色结合，染成紫蓝色，称为碱性物质[10]。然而，吉姆萨染色显示细胞和寄生虫的染色更好，结构更清晰，细胞质和中性颗粒的染色差[11]。免疫组化是病理诊断中常用的检查方法。当显微镜下无法确定细胞或组织的来源时，可加用免疫组化来确定肿瘤的来源和良恶性的区分。有时显微镜下可判断为癌细胞，但无法进一步明确病理分类，可通过免疫组化进一步确诊，如鳞癌、腺癌、小细胞癌等淋巴结活检时做完后，需要做免疫组化，确定原发部位，才能找到原发病灶。免疫组化也可作为恶性肿瘤诊断和鉴别诊断的重要依据，判断良性肿瘤时也需要检查免疫组化。免疫组化染色是免疫学中基于抗原与抗体特异性结合的反应原理，一般采用生物素标记抗体的方法来显示组织中的抗原，研究抗原的定位、定性和相对定量[12]。根据切片情况，我们选择是否加免疫组化。典型病例无须检查即可确诊，无须做免疫组化。如不能确诊，应进一步通过免疫组化确定肿瘤类型，以免影响患者的治疗。免疫组化染色是病理科的一种辅助检查方法。通常，当患者的疾病不是特别典型，或者疾病难以病理分类时，会采用免疫组化染色辅助诊断。免疫组化染色是利用已知抗体检测组织中未知抗原的抗原和抗体染色方法。组织中存在不同的抗原表型，每种疾病的蛋白表达可能不同。不同的抗体用于检测组织中不同的抗原，以指示组織来源的疾病，或通过蛋白质的表达对组织来源进行分类。
综上所述，相比特殊染色，免疫组化染色显示幽门螺杆菌的检验的效果更佳，阳性率高，漏诊率低，灵敏度和特异性高，具有临床价值。
参考文献
[1] 张淦梅.肿瘤病理诊断中特殊染色联合免疫组化技术的应用效果及检测阳性率评价[J].临床检验杂志（电子版），2019，8（4）：262-263.
[2] 马钰，刘屹，普彦淞，等.P504S，Ki-67对老年胃癌的早期诊断价值及与幽门螺旋杆菌的相关性研究[J].现代肿瘤医学，2020，301（19）：109-113.
[3] 贾坤，苏建荣.胃癌组织中IFN-γ，IL-4和SOX-2蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性分析[J].中国临床医学，2019，26（6）：900-904.
[4] 万维松，王乐，胡余昌，等.免疫组化染色与-（14）C尿素呼气试验在幽门螺杆菌相关胃炎诊断中的比较[J].临床与实验病理学杂志，2019，35（1）：51-54.
[5] 武才琪，王庆林，李盼，等.P53，PCNA，CA724，胃泌素17及幽门螺杆菌抗体联合检测在萎缩性胃炎与早期胃癌鉴别中的应用价值[J].中国微生态学杂志，2020，32（2）：72-76.
[6] 喻斌，曾孟晖，徐寅，等.肝胃百合汤对慢性应激与幽门螺杆菌双重损伤因素模型小鼠胃黏膜组织HSP70、NF-κB蛋白表达的影响[J].湖南中医药大学学报，2019，12（9）：1073-1078.
[7] 徐月娥，李淑湘，高鑫，等.苏州两所幼儿园儿童感染幽门螺杆菌的危险因素及口腔清洁措施对降低口腔幽门螺杆菌感染的作用[J].华西口腔医学杂志，2019，37（1）：70-75.
[8] 徐文敏，张海燕，何苗，等.幽门螺旋杆菌感染性胃癌组织中Cyclin D1、MMP-9的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2019，35（2）：213-215.
[9] 毛勇，王军，陈文燕.CCR3联合Cyclin D1在幽门螺旋杆菌感染所致胃癌及癌前病变中的诊断价值[J].甘肃科学学报，2020，148（6）：28-34.
[10] 姚莉，汤显斌，袁玲玲，等.硫酸亚铁特殊染色与免疫组织化学双重染色在黑色素肿瘤诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2020，49（5）：482-484.
[11] 张强，侯丹杰，陈广生，等.Calretinin，S100免疫组化染色及二者联合检测在新生儿先天性巨结肠诊断中的应用价值研究[J].现代消化及介入诊疗，2020，25（10）：99-102.
[12] 孙林雍，严嘉琦，陈昶，等.荧光定量PCR与抗酸特殊染色对疑似骨关节结核中结核分枝杆菌的检测对比[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（9）：101-103.