【摘 要】
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目的 筛选糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）破骨细胞中差异表达的环状RNA（circRNA），并分析地塞米松对其作用。方法 通过密度差异离心法分离收集9例患者血液中的单核细胞，设置对照组、地塞米松刺激组（1×10-7M地塞米松+50 ng/ml核因子κ-B配体受体致活剂（RANKL）+25 ng/ml人乳腺癌细胞（MCF）-1）和诱导组(50 ng/ml RANKL+25 ng/ml巨噬细胞集落刺激
【基金项目】
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浙江省温州市科研项目（Y20190409）～～；
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目的 筛选糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）破骨细胞中差异表达的环状RNA（circRNA），并分析地塞米松对其作用。方法 通过密度差异离心法分离收集9例患者血液中的单核细胞，设置对照组、地塞米松刺激组（1×10-7M地塞米松+50 ng/ml核因子κ-B配体受体致活剂（RANKL）+25 ng/ml人乳腺癌细胞（MCF）-1）和诱导组(50 ng/ml RANKL+25 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）3个分组，分别诱导分化培养7、14、21 d，观察单核细胞分化成破骨细胞的情况。收集分别培养7、14、21 d细胞进行circRNAs表达谱测序，并比较分析差异表达的circRNAs，选择差异显著的9个cirRNAs进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）验证。验证结果与筛选的circRNA差异性一致的，进行基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 地塞米松组培养7、14和21 d后的样本相较于诱导组和对照组形成更大量的破骨细胞。芯片结果显示，与对照组相比，干扰组中共发现3 776个差异表达的circRNAs（FC≥2.0,P＜0.05），其中574个上调、3 202个下调。差异表达的circRNAs主要影响鸟嘌呤-5′-三磷酸GTP酶激活剂的活性、腺苷核糖核苷酸的结合等，对细胞外基质等细胞成分的形成也有影响。RT-PCR表明hsa-circ-006157的表达水平与芯片结果差异最小。构建circRNA-miRNA-mRNA共表达网络，结果显示hsa-circ-006157与hsa-miR-4723-3p、hsa-miR-297、hsa-miR-502-3p和hsa-miR-7111-3p存在密切相互作用，主要在细胞外信号调节激酶（ERK）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）和转化生长因子（TGF-β）等通路的信号转导方向起作用。结论 本研究证实了地塞米松在单核细胞诱导分化为破骨细胞过程中的促进作用，并筛选验证了其中差异表达的基因hsa-circ-006157，进一步分析其相互作用及涉及的通路，从体外阐明cicrRNA在中的作用及机制。
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