【摘 要】
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目的：建立绿色荧光蛋白（GFP）标记的急性淋巴细胞白血病（ALL）移植瘤小鼠模型，研究ALL髓外浸润过程中血清游离DNA （cfDNA）特异基因甲基化的变化，为ALL髓外浸润监测提供理论和实验依据。方法：60只ICR小鼠随机分为对照组、实验15 d组和实验30 d组，每组20只。实验组小鼠通过尾静脉注射构建GFP标记ALL移植小鼠模型，流式细胞术检测白血病细胞髓外浸润情况。分别在建模后第15和30
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81201354）； 吉林省科技厅科技发展计划项目（20200403118SF）； 吉林省教育厅科学技术研究“十二五”规划项目（吉教科验字[2017] 196）； 吉林省吉林市科技局项目中科院苏州医工所合作专项（E055PY03）；
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目的：建立绿色荧光蛋白（GFP）标记的急性淋巴细胞白血病（ALL）移植瘤小鼠模型，研究ALL髓外浸润过程中血清游离DNA （cfDNA）特异基因甲基化的变化，为ALL髓外浸润监测提供理论和实验依据。方法：60只ICR小鼠随机分为对照组、实验15 d组和实验30 d组，每组20只。实验组小鼠通过尾静脉注射构建GFP标记ALL移植小鼠模型，流式细胞术检测白血病细胞髓外浸润情况。分别在建模后第15和30天时采用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测各组小鼠血清中双加氧酶2 （TET2）、DNA甲基转移酶3α （DNMT3a）、DNA甲基转移酶3β （DNMT3b）、Wnt家族成员5A （Wnt5A）及逆转座子长散布核元件-1 （LINE-1） mRNA表达水平，重亚硫酸盐测序法（BSP）检测各组血清中Wnt5A和LINE-1启动子区甲基化水平。结果：实验15 d组和实验30 d组小鼠脾脏组织中均可见明显绿色荧光，且实验30 d组较实验15 d组荧光强度增强；实验30 d组小鼠脾脏质量高于对照组（P＜0.05），脾肿大较为明显。流式细胞术检测，与对照组比较，实验15 d组和实验30 d组小鼠外周血细胞荧光强度均明显增强，且实验30 d组小鼠外周细胞血荧光强度较实验15 d组增强（P＜0.05）。RT-qPCR法检测，与对照组比较，实验15 d组和实验30 d组小鼠血清中Wnt5A和TET2mRNA表达水平均明显降低（P＜0.05）,LINE-1、DNMT3a和DNMT3b mRNA表达水平明显升高（P＜0.05）。BSP法检测，与对照组比较，实验15 d组和实验30 d组小鼠血清LINE-1启动子区甲基化水平明显降低（P＜0.05），在浸润过程中逐步呈现低甲基化；抑癌基因Wnt5A启动子区甲基化水平明显升高（P＜0.05）。结论：ALL移植瘤小鼠模型于建模早期即出现髓外浸润，血清cfDNA中Wnt5A和LINE-1启动子区的异常甲基化直接影响其异常表达。cfDNA特异位点甲基化水平检测可为ALL早期诊断与治疗监测提供新的方法和策略。
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