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尽管目前对猪肺炎支原体的免疫机制尚未完全清楚，但接种疫苗确实能有助于减少肺部损伤的大小和持续时间。疫苗中的抗原成分和佐剂成分对产生免疫应答至关重要。非产毒素性脂多糖似乎可促进体液和细胞介导的对猪肺炎支原体疫苗的反应。
中图分类号：S854 文献标识码：C 文章编号：1001-0769（2017）06-0026-04
地方流行性肺炎（Enzootic Pneumonia，EP）是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，M. hyo）引起的最常见的猪呼吸道疾病之一。同时，M. hyo也是猪呼吸道疾病综合征（Porcine Respiratory Disease Complex，PRDC）的主要病原体之一。由于EP和PRDC可导致猪的生长速度减慢、料肉比提高以及治疗费用增加等不利结果，从而会给养猪业带来巨大的经济损失。在交叉感染PRDC的情况下，还可导致死亡率增加。
研究表明，猪肺炎支原体可促进猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSv）和猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）的复制，增强PRRSv或A. pleuropneunwniae所引起的猪肺炎的严重性。
1 免疫的作用
当前人们对猪肺炎支原体的免疫尚未完全清楚。但可以明确的是，这种病原体是非侵入性的，可诱导受感染猪发生肺炎（图1），对产生强烈的免疫应答具有重要作用。M. hyo几乎能与宿主免疫系统的各种成分相互作用。研究表明，在被感染的肺中，促炎和抗炎介质，以及免疫调节介质如前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）、多种白细胞介素、肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-Alfa，TNF-α）和γ-干扰素（Interferon-Gamma，IFN-γ）增多。这些物质的一部分发挥清除病原体的作用；而另一部分则产生相反的作用，会抑制免疫系统的功能。
2 免疫接种
迄今为止，当未感染的猪与M. hyo感染猪接触时，接种疫苗不能预防M. hyo对未感染猪的感染。然而，接种疫苗后，猪的肺部病变面积小于未接种疫苗的猪，同时治愈的速度也更快，未接种疫苗的猪可经上呼吸道排出更多M. hyo。这表明，免疫接种后，猪肺部病变较少或病变程度较轻，M. hyo增殖减少，通过鼻排出的病原体数量也同时减少。接种疫苗的主要优点包括可提高猪的日增重（2%～8%）和改善饲料转化率（2%～5%）。
预防M. hyo感染涉及多种免疫应答机制。与未接种疫苗的猪相比，猪接种疫苗后感染 M. hyo，其肺部免疫系统发生显著变化。黏膜抗体和细胞免疫应答对控制支原体肺炎似乎都很重要。猪接种疫苗后，其支气管肺泡灌洗液（BAL液）中巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的含量显著减少，而肺IgA分泌细胞的数量增加。接种疫苗可以使猪在感染M. hyo后肺部IgA和IgG数量增多。IgA抗体可防止支原体黏附到呼吸道上，而IgG抗体则参与抗原调理作用，增强肺泡巨噬细胞的吞噬作用。猪接种疫苗后，肺部TNF-α、IL-1和IL-6数量减少，这可能抑制了炎症细胞的渗透作用，结果肺部病变减少。
3 通过模式识别受体激活
感染支原体以及接种疫苗后，宿主反应的首个生理事件之一是外来抗原与专职抗原递呈细胞（Professional Antigen Presenting Cells，APC）之间的相互作用。这些物质对启动先天免疫答应反应和将处理的抗原递呈给T淋巴细胞以激活获得性免疫来说至关重要，它们受到多种协同刺激蛋白的支持，是细胞因子的产物。为了在免疫应答阶段指导这些功能，单核细胞或其他APC通過将其各自的模式识别受体（Pattern-Recognition Receptors，PRR）与保守的微生物结构相结合进行激活。在PRRs中，Toll样受体（Toll Like Receptors，TLR）在启动这种免疫应答方面发挥着重要作用。Toll样受体可识别许多成分，如脂多糖、脂蛋白和其他细菌成分。
支原体表面的脂蛋白具有强烈的免疫调节作用，尤其是在激活巨噬细胞方面。脂蛋白与TLR相互作用。M. hyo通过结合到TLR 2和TLR 6上来刺激巨噬细胞。
TLR 4通过细菌脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）介导信号传导。LPS介导的TLR 4信号传导属于免疫应答的关键启动机制，随后还可激活获得性免疫。研究表明，LPS可引发多种细胞内信号传导事件，包括NF-κB活化，NF-κB的激活可导致许多促炎性介质（如白细胞介素IL-1、白细胞介素IL-6、白细胞介素IL-8和TNF-α）合成和释放。TLR 4介导和其他信号传导级联反应之间的相互作用能够产生有效的免疫应答（图2）。
4 试验性研究
多项试验性研究已经证实，由特殊的疫苗佐剂Imuvant辅助的猪肺炎支原体灭活疫苗Hyogen （法国诗华动物保健公司生产）可产生良好的保护作用。该研究发现，疫苗接种使猪产生全身性免疫反应以及局部免疫应答调制，即强烈的IgA反应，并可减少促炎细胞因子的生成，减少经粪便排出的M. hyo，并可显著减少肺部病变。该疫苗除了使用独特的肺炎支原体菌株外，该佐剂在保证疫苗功效方面也发挥了重要的作用。
诗华公司开发的此佐剂为水包油乳剂，是由从大肠杆菌J5株分离中得到的无毒LPS的优化剂型。脂多糖通过激活巨噬细胞和其他抗原递呈细胞来刺激猪的先天免疫应答。M. hyo的脂蛋白抗原可结合到该佐剂的水/油界面，进而可增加APC的摄入。免疫系统各种成分的级联刺激可增强抗体介导和细胞介导的免疫应答。结果是可以有效地启动抗原识别、主动免疫应答以及长时间免疫记忆，从而对M. hyo产生更彻底的预防作用。
在体外研究中，J5 LPS可以强烈刺激单核细胞的活性，这可通过氧化爆发测量（图3）。活性氧的释放（氧化爆发）可以作为白细胞激活的指示剂。
5 J5组分
一项最新的研究评估了该佐剂J5成分对该疫苗对仔猪免疫力的增强作用。试验猪接种含J5 LPS的完整佐剂的疫苗，或接种含M. hyo抗原但只以矿物油为佐剂而无J5成分的测试疫苗。未接种疫苗的仔猪作为试验的阳性对照。接种疫苗18 d后，仔猪用M. hyo强毒株进行攻毒。攻毒28 d后，仔猪进行扑杀，并进行肺部损伤评分。结果表明，与佐剂不含J5成分的疫苗相比，佐剂含J5成分的疫苗能使接种猪产生更强烈的体液介导和细胞介导的免疫应答，尤其是细胞介导的免疫应答更显著（图4和图5）。
对安乐死仔猪肺部病变评分后表明，仔猪接种了佐剂含J5成分的疫苗，其支气管肺炎发病情况较未接种疫苗的对照组猪明显减少（P<0.05）；另外，与接种佐剂不含J5成分的测试性疫苗相比，仔猪接种了佐剂含J5成分的疫苗后，肺部病变数量明显减少（图6）。
6 结论
这些研究证实，J5在增强Imuvant的辅助作用（包括产生强烈高效的免疫应答和预防M. hyo感染后引发支气管肺炎）上能起到有益的作用。特别是，由于J5成分和产生较高水平的抗体，细胞介导的免疫力得到显著增强。增强的免疫力使肺部病变评分值减小。该佐剂能够支持Hyogen中的M. hyo抗原，使其成为仍存在地方性肺炎控制问题的一个有效解决方案。□□
原题名：How to further improve M. hyo vaccine efficacy（英文）
原作者：Roman Krejci（法国诗华动物保健公司猪公司技术经理）
中图分类号：S854 文献标识码：C 文章编号：1001-0769（2017）06-0026-04
地方流行性肺炎（Enzootic Pneumonia，EP）是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，M. hyo）引起的最常见的猪呼吸道疾病之一。同时，M. hyo也是猪呼吸道疾病综合征（Porcine Respiratory Disease Complex，PRDC）的主要病原体之一。由于EP和PRDC可导致猪的生长速度减慢、料肉比提高以及治疗费用增加等不利结果，从而会给养猪业带来巨大的经济损失。在交叉感染PRDC的情况下，还可导致死亡率增加。
研究表明，猪肺炎支原体可促进猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSv）和猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）的复制，增强PRRSv或A. pleuropneunwniae所引起的猪肺炎的严重性。
1 免疫的作用
当前人们对猪肺炎支原体的免疫尚未完全清楚。但可以明确的是，这种病原体是非侵入性的，可诱导受感染猪发生肺炎（图1），对产生强烈的免疫应答具有重要作用。M. hyo几乎能与宿主免疫系统的各种成分相互作用。研究表明，在被感染的肺中，促炎和抗炎介质，以及免疫调节介质如前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）、多种白细胞介素、肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-Alfa，TNF-α）和γ-干扰素（Interferon-Gamma，IFN-γ）增多。这些物质的一部分发挥清除病原体的作用；而另一部分则产生相反的作用，会抑制免疫系统的功能。
2 免疫接种
迄今为止，当未感染的猪与M. hyo感染猪接触时，接种疫苗不能预防M. hyo对未感染猪的感染。然而，接种疫苗后，猪的肺部病变面积小于未接种疫苗的猪，同时治愈的速度也更快，未接种疫苗的猪可经上呼吸道排出更多M. hyo。这表明，免疫接种后，猪肺部病变较少或病变程度较轻，M. hyo增殖减少，通过鼻排出的病原体数量也同时减少。接种疫苗的主要优点包括可提高猪的日增重（2%～8%）和改善饲料转化率（2%～5%）。
预防M. hyo感染涉及多种免疫应答机制。与未接种疫苗的猪相比，猪接种疫苗后感染 M. hyo，其肺部免疫系统发生显著变化。黏膜抗体和细胞免疫应答对控制支原体肺炎似乎都很重要。猪接种疫苗后，其支气管肺泡灌洗液（BAL液）中巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的含量显著减少，而肺IgA分泌细胞的数量增加。接种疫苗可以使猪在感染M. hyo后肺部IgA和IgG数量增多。IgA抗体可防止支原体黏附到呼吸道上，而IgG抗体则参与抗原调理作用，增强肺泡巨噬细胞的吞噬作用。猪接种疫苗后，肺部TNF-α、IL-1和IL-6数量减少，这可能抑制了炎症细胞的渗透作用，结果肺部病变减少。
3 通过模式识别受体激活
感染支原体以及接种疫苗后，宿主反应的首个生理事件之一是外来抗原与专职抗原递呈细胞（Professional Antigen Presenting Cells，APC）之间的相互作用。这些物质对启动先天免疫答应反应和将处理的抗原递呈给T淋巴细胞以激活获得性免疫来说至关重要，它们受到多种协同刺激蛋白的支持，是细胞因子的产物。为了在免疫应答阶段指导这些功能，单核细胞或其他APC通過将其各自的模式识别受体（Pattern-Recognition Receptors，PRR）与保守的微生物结构相结合进行激活。在PRRs中，Toll样受体（Toll Like Receptors，TLR）在启动这种免疫应答方面发挥着重要作用。Toll样受体可识别许多成分，如脂多糖、脂蛋白和其他细菌成分。
支原体表面的脂蛋白具有强烈的免疫调节作用，尤其是在激活巨噬细胞方面。脂蛋白与TLR相互作用。M. hyo通过结合到TLR 2和TLR 6上来刺激巨噬细胞。
TLR 4通过细菌脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）介导信号传导。LPS介导的TLR 4信号传导属于免疫应答的关键启动机制，随后还可激活获得性免疫。研究表明，LPS可引发多种细胞内信号传导事件，包括NF-κB活化，NF-κB的激活可导致许多促炎性介质（如白细胞介素IL-1、白细胞介素IL-6、白细胞介素IL-8和TNF-α）合成和释放。TLR 4介导和其他信号传导级联反应之间的相互作用能够产生有效的免疫应答（图2）。
4 试验性研究
多项试验性研究已经证实，由特殊的疫苗佐剂Imuvant辅助的猪肺炎支原体灭活疫苗Hyogen （法国诗华动物保健公司生产）可产生良好的保护作用。该研究发现，疫苗接种使猪产生全身性免疫反应以及局部免疫应答调制，即强烈的IgA反应，并可减少促炎细胞因子的生成，减少经粪便排出的M. hyo，并可显著减少肺部病变。该疫苗除了使用独特的肺炎支原体菌株外，该佐剂在保证疫苗功效方面也发挥了重要的作用。
诗华公司开发的此佐剂为水包油乳剂，是由从大肠杆菌J5株分离中得到的无毒LPS的优化剂型。脂多糖通过激活巨噬细胞和其他抗原递呈细胞来刺激猪的先天免疫应答。M. hyo的脂蛋白抗原可结合到该佐剂的水/油界面，进而可增加APC的摄入。免疫系统各种成分的级联刺激可增强抗体介导和细胞介导的免疫应答。结果是可以有效地启动抗原识别、主动免疫应答以及长时间免疫记忆，从而对M. hyo产生更彻底的预防作用。
在体外研究中，J5 LPS可以强烈刺激单核细胞的活性，这可通过氧化爆发测量（图3）。活性氧的释放（氧化爆发）可以作为白细胞激活的指示剂。
5 J5组分
一项最新的研究评估了该佐剂J5成分对该疫苗对仔猪免疫力的增强作用。试验猪接种含J5 LPS的完整佐剂的疫苗，或接种含M. hyo抗原但只以矿物油为佐剂而无J5成分的测试疫苗。未接种疫苗的仔猪作为试验的阳性对照。接种疫苗18 d后，仔猪用M. hyo强毒株进行攻毒。攻毒28 d后，仔猪进行扑杀，并进行肺部损伤评分。结果表明，与佐剂不含J5成分的疫苗相比，佐剂含J5成分的疫苗能使接种猪产生更强烈的体液介导和细胞介导的免疫应答，尤其是细胞介导的免疫应答更显著（图4和图5）。
对安乐死仔猪肺部病变评分后表明，仔猪接种了佐剂含J5成分的疫苗，其支气管肺炎发病情况较未接种疫苗的对照组猪明显减少（P<0.05）；另外，与接种佐剂不含J5成分的测试性疫苗相比，仔猪接种了佐剂含J5成分的疫苗后，肺部病变数量明显减少（图6）。
6 结论
这些研究证实，J5在增强Imuvant的辅助作用（包括产生强烈高效的免疫应答和预防M. hyo感染后引发支气管肺炎）上能起到有益的作用。特别是，由于J5成分和产生较高水平的抗体，细胞介导的免疫力得到显著增强。增强的免疫力使肺部病变评分值减小。该佐剂能够支持Hyogen中的M. hyo抗原，使其成为仍存在地方性肺炎控制问题的一个有效解决方案。□□
原题名：How to further improve M. hyo vaccine efficacy（英文）
原作者：Roman Krejci（法国诗华动物保健公司猪公司技术经理）