【摘 要】
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目的 构建反义Ki-67和Bc1-2双表达栽体用于肿瘤基因治疗的研究.方法 从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增Ki-67和Bc1-2 cDNA,T-A克隆到pMD18-T Simple栽体.Ki-67经BamH I和Cla I
【机 构】
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兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所
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目的 构建反义Ki-67和Bc1-2双表达栽体用于肿瘤基因治疗的研究.方法 从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增Ki-67和Bc1-2 cDNA,T-A克隆到pMD18-T Simple栽体.Ki-67经BamH I和Cla I双酶切,Bc1-2经EcoR I和Xho I双酶切后,分别反向插入pVITR02的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2),构建单表达质粒pVITR02-AsKi-67扣pVITR02-AsBc1-2,再将Bc1-2EcoR I和Xho I双酶切,反向插入pVITR02-AsKi-67的mcs2,构建pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2双表达质粒.结果限制性内切酶和测序表明单表达质粒pVITR02-AsKi-67和pVITR02-AsBc1-2以及双表达质粒pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2构建成功.结论 本研究成功构建了pVITR02-AsKi-67和pVITR02-AsBc1-2单表达质粒,及pVITR02-AsKi-67-AsBc1-2双表达质粒.
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