【摘 要】
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目的探索菌落PCR差异筛选cDNA片段文库的可行性. 方法在用抑制性PCR构建cDNA片段文库的同时,分别制备正、反向减法杂交探针并用碱性磷酸酶直接标记.随后用这些探针与菌落PCR
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院风湿科
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目的探索菌落PCR差异筛选cDNA片段文库的可行性. 方法在用抑制性PCR构建cDNA片段文库的同时,分别制备正、反向减法杂交探针并用碱性磷酸酶直接标记.随后用这些探针与菌落PCR的产物杂交,从而筛选出差异表达克隆,并再次用RT-PCR证实其差异表达.结果建立的菌落PCR反应体系经济实用,方法稳定,并成功地从500个克隆中筛选出差异表达克隆.结论菌落PCR可用于差异筛选构建于质粒载体的cDNA片段文库.
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