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目的
探讨miR-146a对父代高脂高糖饮食(HGFD)背景下新生鼠肝组织胰岛素受体(insr)基因表达的影响及作用机制。
方法取5周龄雄性SD大鼠随机分为：正常饮食组(ND组)及HGFD组，分组饲养3个月后与正常雌鼠交配。检测子代新生鼠血糖水平、葡萄糖耐量(GTT)及胰岛素耐量(ITT)。提取子代新生鼠肝组织miRNAs，合成cDNA。采用二代测序技术比较两组差异miRNAs，并通过实时荧光定量PCR(qPCR)的方法验证这些miRNA的表达差异。提取子代新生鼠肝组织基因组DNA、总RNA及总蛋白，qPCR比较父代HGFD对子代新生鼠肝组织中INSR mRNA相对表达量及INSR启动子甲基化水平的影响，分别分析INSR表达及甲基化水平与差异分子miR-146a表达水平的相关性。上调大鼠正常肝细胞系BRL-3A中miR-146a，观察miR-146a对肝细胞中INSR基因启动子甲基化水平(qPCR)及蛋白表达(Western-blot)的影响。
结果HGFD组F1代雄性仔鼠葡萄糖耐量显著下降和胰岛素耐受。miRNA测序获得差异microRNAs 60个，HGFD组上调的45个，下调的15个。qPCR检测提示其中8个miRNAs在扩大样本中仍有显著性差异，miR-146a在HGFD组仔鼠肝中表达上调超过10倍。miRNA-146a的表达水平与INSR mRNA的相对表达量负性相关，与INSR甲基化水平正相关。上调BRL-3A细胞中miR-146a表达，INSR基因启动子区的甲基化水平显著增强而蛋白表达则受到抑制。
结论父代HGFD背景下F1代仔鼠肝组织中INSR表达抑制与miR-146a促INSR基因甲基化有关。