【摘 要】
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目的：探讨甘草含药血清激活Nrf2/HO-1通路抑制铁死亡对脂多糖（LPS）诱导的人结肠上皮腺癌细胞（Caco2）炎症的影响。方法：将Caco2细胞分为正常组、模型组(LPS，200 nmol·L-1)、甘草含药血清低中高浓度组（5%、10%、20%），铁死亡抑制剂组(3-氨基-4-环己基氨基苯甲酸乙酯，Fer-1，10 μmol·L-1)。正常组细胞正常培养，其他组建立炎症模型，甘草含药血清低中
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（82274375，81974536）； 安徽省高校科学研究项目（YJS20210493）； 安徽省高校自然科学研究重点项目（KJ2019A0449，KJ2020A0387）；
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目的：探讨甘草含药血清激活Nrf2/HO-1通路抑制铁死亡对脂多糖（LPS）诱导的人结肠上皮腺癌细胞（Caco2）炎症的影响。方法：将Caco2细胞分为正常组、模型组(LPS，200 nmol·L-1)、甘草含药血清低中高浓度组（5%、10%、20%），铁死亡抑制剂组(3-氨基-4-环己基氨基苯甲酸乙酯，Fer-1，10 μmol·L-1)。正常组细胞正常培养，其他组建立炎症模型，甘草含药血清低中高浓度组分别加入5%、10%、20%含药血清处理24 h，铁死亡抑制剂组给予Fer-1处理24 h。透射电镜观察各组线粒体形态；流式细胞术检测细胞内Fe2+水平；微板法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核因子相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、铁蛋白重链1（FTH1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GSH-Px4）蛋白的表达水平。运用小干扰核糖核酸（siRNA）的方式来观察Nrf2在铁死亡调控中的作用。将干扰后细胞分为空载体组（Negative control，NC），Si-Nrf2组，含药血清（20%）+Si-Nrf2组，含药血清（20%）+NC组。微板法检测MDA、SOD、GSH-Px水平；Western blot检测Nrf2、HO-1、FTH1、GSH-Px4蛋白表达水平。结果：与正常组比较，模型组线粒体固缩，线粒体膜增厚，线粒体形态变小；模型组Fe2+含量显著增加；SOD活性降低，GSH-Px表达下降，MDA含量显著增高（P＜0.05）；Nrf2、HO-1、FTH1和GSH-Px4表达降低（P＜0.05）。甘草含药血清处理组，Fe2+水平含量显著降低（P＜0.05）；SOD活性和GSH-Px含量显著升高，MDA水平显著降低（P＜0.05）；Nrf2、HO-1、FTH1与GSH-Px4蛋白的表达显著增高（P＜0.05）。机制研究发现，与NC组比较，转染Nrf2 siRNA的细胞中MDA含量增加，SOD活力下降，GSH-Px含量减少；Nrf2、HO-1、FTH1和GSH-Px4蛋白含量降低明显；与Si-Nrf2组比较，在甘草含药血清干预后，细胞内MDA含量降低，SOD活力提高，GSH-Px含量上升；Nrf2、HO-1、FTH1和GSH-Px4蛋白表达水平明显升高。结论：甘草含药血清可降低LPS诱导的Caco2细胞炎症因子及氧化应激水平，其机制与促进Nrf2/HO-1通路的表达，减轻细胞内脂质过氧化从而抑制铁死亡的发生有关。
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