【摘 要】
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目的原核表达SMB-1型金属β-内酰胺酶,并研究其水解β-内酰胺类抗生素的活性。方法利用化学合成方法合成blaSMB-1基因,经PCR扩增后克隆至pET28a载体,构建重组的原核表达质粒p
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目的原核表达SMB-1型金属β-内酰胺酶,并研究其水解β-内酰胺类抗生素的活性。方法利用化学合成方法合成blaSMB-1基因,经PCR扩增后克隆至pET28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28a-SMB-1,转化至E.coli BL21(DE3),诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,测定其水解底物时的酶促反应动力学参数及最适pH值和温度。结果重组质粒经测序证明其正确性;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,纯化后蛋白的质量浓度为0.20 mg/mL,该酶对本实验中除氨曲南外的所有β-内酰胺类抗生素均具有较高水解活性,其最适pH值为8.0,最适温度为40℃。结论利用工程菌E.coliBL21(DE3)-pET28a-SMB-1成功实现了SMB-1型金属β-内酰胺酶的原核表达,为深入研究其生物学功能及作用机制提供了物质基础,同时也为研发该酶的抑制剂提供了靶标物质。
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