【摘 要】
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目的建立从外周血中获取循环内皮细胞(CECs)的免疫磁珠分离技术。方法取1 mL全血按1∶2稀释,加入20μL抗CD146磁珠抗体,4℃孵育,再加入等体积缓冲液,置于磁架上,吸弃液体,用1
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学微循环研究所
【基金项目】
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中国科学院知识创新工程(KJCX1-SW-07)~~
论文部分内容阅读
目的建立从外周血中获取循环内皮细胞(CECs)的免疫磁珠分离技术。方法取1 mL全血按1∶2稀释,加入20μL抗CD146磁珠抗体,4℃孵育,再加入等体积缓冲液,置于磁架上,吸弃液体,用100μL缓冲液重悬磁珠。用吖啶橙或G iem sa染色在荧光倒置相差显微镜下计数与磁珠结合的细胞,并用抗-vWF及CD31进行免疫细胞化学鉴定。结果经抗-vWF及CD31鉴定所分选的CECs是内皮细胞。正常健康体检者的CECs数量为10.5(6~16.5)个/mL。使用此法对正常人脐静脉内皮细胞(HUVECs)混合于正常人全血中的最高回收率为91%。结论用CD146免疫磁珠技术分离CECs,具有客观、准确、省时、特异性强及回收率高、取血量少和对内皮细胞损伤小的特点,本方法可用于不同疾病患者血液中CECs的定量检测及其功能状态分析。
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