羟基喜树碱对青光眼滤过术后球结膜下成纤维细胞凋亡的影响及其机制研究

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目的观察羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对青光眼滤过术失败的球结膜下瘢痕组织成纤维细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。设计实验研究。研究对象球结膜下瘢痕组织成纤维细胞。方法体外培养青光眼滤过手术失败的球结膜下瘢痕组织成纤维细胞并鉴定。应用不同浓度的HCPT作用于成纤维细胞。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用RT-PCR方法检测HCPT作用下,有或无广谱caspase阻断剂(Z-VAD-FMK)时,凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA量的变化。主要指标凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA量的变化。结果流式细胞检测显示,0.06、0.25、1.0、4.0 mg/l的HCPT作用于成纤维细胞24小时后,其凋亡率分别为0.87%、4.97%、5.76%、33.1%(P<0.05)。RT-PCR法显示,HCPT作用时caspase-3和caspase-9 mRNA的量较空白组明显增多,而caspase-8 mRNA的量较空白组减少;加入Z-VAD-FMK后,caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA的量均减少。结论 HCPT在体外可诱导青光眼滤过手术球结膜下瘢痕组织成纤维细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性,该凋亡可能通过caspase-3和caspase-9途径来实现。
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