评价1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在神经生长因子β(NGF-β)减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧时内质网应激性细胞凋亡中的作用。
方法H9c2细胞株，以5×105个/ml的密度接种于96孔板(100 μl/孔)。采用随机数字表法，将培养孔分为5组(n＝15)：正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF-β组(N组)、NGF-β＋NGF-β受体trkA拮抗剂K252a组(N＋K组)和NGF-β＋PI3K抑制剂LY294002组(N＋L组)。H/R组、N组、N＋K组和N＋L组接种于无氧培养基，在95% N2-5%CO2无氧培养箱内孵育4 h，然后在有氧培养基中培养4 h；N组、N＋K组和N＋L组复氧的同时分别用含NGF-β、NGF-β与K252a的混合液和NGF-β与LY294002混合液的有氧培养基孵育，NGF-β、K252a和LY294002的终浓度分别为50 ng/ml、100 nmol/L和50 μmol/L。采用CCK-8法测定细胞存活率，采用流式细胞术测定细胞凋亡率，采用Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、caspase-12、Akt、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)的表达水平，并计算p-Akt与Akt表达的比值(p-Akt/Akt)。
结果与C组比较，H/R组和N组细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，H/R组GRP78、CHOP和caspase-12的表达上调，N组p-Akt/Akt升高(P<0.05)；与H/R组比较，N组细胞存活率升高，细胞凋亡率降低，GRP78、CHOP和caspase-12的表达下调，p-Akt/Akt升高(P<0.05)，N＋K组和N＋L组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)；与N组比较，N＋K组和N＋L组细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，GRP78、CHOP和caspase-12的表达上调，p-Akt/Akt降低(P<0.05)。
结论NGF-β可减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧时内质网应激性细胞凋亡，其机制与激活PI3K信号通路有关。