【摘 要】
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目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3’UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野
【机 构】
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郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室
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目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3’UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为4组,分别共转染miR-494或阴性对照和pmir GLO-CLPTM1L-W 3’UTR或pmir GLOCLPTM1L-M 3’UTR,检测4组细胞中荧光素酶活性。结果:酶切和测序证实成功构建了野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒pmir GLO-CLPTM1L-W 3’UTR和pmir GLO-CLPTM1L-M 3’UTR;与共转染miR-494 mimics和突变型CLPTM1L3’UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(1.056 4±0.163 4)、共转染阴性对照序列和突变质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.961 3±0.177 9)或野生型质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.983 4±0.001 2)相比,共转染miR-494 mimics和野生型CLPTM1L 3’UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.651 6±0.136 4)明显降低(F=4.476,P=0.040),其他3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLPTM1L与miR-494存在靶向关系。
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