【摘 要】
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本研究旨在了解猪流行性腹泻病毒(PEDV) S2蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒及亚单位疫苗的研究奠定基础.试验通过反转录PCR的方法扩增PEDV CH/GX/2015/750A株S2基因部分片段
【机 构】
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广西兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,南宁530001广西农业职业技术学院,南宁530007;广西兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,南宁530001;广西大学,南宁,530005;
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本研究旨在了解猪流行性腹泻病毒(PEDV) S2蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒及亚单位疫苗的研究奠定基础.试验通过反转录PCR的方法扩增PEDV CH/GX/2015/750A株S2基因部分片段(S2A),将其克隆后插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET32a-S2A.将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达重组蛋白,Ni柱亲和层析法纯化重组蛋白,Western blotting检测重组蛋白S2A的反应原性.纯化复性的重组蛋白S2A免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测获得的多克隆抗体效价,间接免疫荧光法验证制备的多克隆抗体的特异性.结果 显示,重组S2A蛋白在IPTG终浓度为0.2 mmol/L时,37℃诱导表达3h可获得最高表达量,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blotting结果显示,纯化复性后的重组蛋白S2A能够与PEDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性.制备的多克隆抗体效价可达1∶32 000,间接免疫荧光结果表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别和结合PEDV.结果 表明,PEDV S2A蛋白具有良好的抗原性,可作为诊断试剂盒或亚单位疫苗的候选抗原.
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