采用ChIP技术分析LSD1靶基因启动子组蛋白甲基化水平

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目的:前期研究中,在结肠癌细胞株SW620、HT-29中筛选出了LSD1调控的4个与转移相关的下游靶基因(CABYR、FOXF2、TLE4、CDH1).本研究的目的是进一步检测LSD1下游调控基因启动子区域组蛋白H3k4、H3k9的甲基化水平,为探讨LSD1影响结肠癌侵袭转移的分子机制提供依据.方法:(1)细胞系培养:10%胎牛血清的L-15培养基作为SW620细胞的培养液;10%胎牛血清的RPMI1640培基作为HT-29细胞的培养液.结果:(1)LSD1与靶基因CABYR、CDH1的启动子区域结合能够产生DNA-蛋白复合体,且通过下调LSD1可明显增加靶基因CABYR的表达水平(P<0.01),而过表达LSD1可明显降低靶基因CABYR的表达水平.通过下调LSD1可明显增加靶基因CDH1的表达水平(P<0.01),过表达LSD1可降低靶基因CDH1的表达水平.结论:在结肠癌细胞中,通过改变LSD1与其下游靶基因的结合丰度,继而下调靶基因启动子区域H3K4me1、H3K4me2的甲基化水平而影响靶基因的表达,这为进一步研究LSD1影响结肠癌侵袭转移的分子机制奠定了基础.
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