【摘 要】
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丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因,与细胞生存和癌症的发生密切相关.但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是
【机 构】
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西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.30600437);西北农林科技大学青年学术骨干支持计划(No.0114030);基本科研业务费专项资金项目(No.QN2009021)资助~~
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丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因,与细胞生存和癌症的发生密切相关.但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是十分清楚.本研究构建了慢病毒干扰载体pLentiH1-Akt2 shRNA 1,2,3及scrambled,经酶切和测序鉴定均正确;这4种干扰载体分别转染HEK293T细胞后,均获得有感染性的病毒颗粒并感染猪前体脂肪细胞.转染HEK293T细胞48 h后real-time PCR分析和转染72 h后Western印迹分析表明,Akt2 shRNA2和shRNA3介导的Akt2 mRNA和蛋白表达被显著下调(P<0.05),其中pLentiH1-Akt2 shRNA3介导的对Akt2 mRNA和蛋白的干扰效率均达到70%以上(P<0.01).进一步研究发现,猪前体脂肪细胞中Akt2被有效干扰后,细胞中脂滴明显减少并变小,且成脂标志基因PPARγ和aP2蛋白水平被显著下调.本研究结果表明,Akt2 knockdown可显著抑制猪前体脂肪细胞分化.
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