【摘 要】
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目的：探讨小陷胸汤对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法：通过CB-DOCK在线平台（http：//clab.labshare.cn/cb-dock/）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10μg·L-1的TGF-β1建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81573864）；
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目的：探讨小陷胸汤对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法：通过CB-DOCK在线平台（http：//clab.labshare.cn/cb-dock/）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10μg·L-1的TGF-β1建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组(0.1、0.2、0.4 g·L-1)，为进一步探讨Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤(0.4 g·L-1)组和Wnt5a-OE+小陷胸汤(0.4 g·L-1)组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca2+浓度变化。结果：分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤(0.1、0.2、0.4 g·L-1)能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（P＜0.05,P＜0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca2+浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P＜0.05,P＜0.01）。结论：小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca2+/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-β1诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。
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