【摘 要】
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目的:研究模拟微重力培养环境下载威灵仙丝素蛋白微球三维培养对软骨细胞表型分化的影响及机制.方法:高压静电法结合冷冻技术制备载威灵仙总皂苷的丝素蛋白多孔微球,扫描电镜
【机 构】
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南京中医药大学附属医院骨伤科,南京210029;南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室,南京210023;南京中医药大学附属医院骨伤科,南京210029;南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室,南
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目的:研究模拟微重力培养环境下载威灵仙丝素蛋白微球三维培养对软骨细胞表型分化的影响及机制.方法:高压静电法结合冷冻技术制备载威灵仙总皂苷的丝素蛋白多孔微球,扫描电镜观察支架的形貌及孔隙,香草醛-高氯酸显色方法检测威灵仙总皂苷的释放率.利用液动力聚焦细胞培养系统体外模拟微重力培养环境,将提取的兔膝关节软骨细胞分为3组:空白组,空白微球组、载威灵仙微球组,培养7d后收集细胞;观察各组软骨细胞的形态及与丝素蛋白微球的黏附情况,CCK-8检测各组细胞增殖活性,RT-qPCR检测软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、TGF-β、SMAD2的mRNA表达,Western blotting检测Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的蛋白表达.结果:构建的丝素蛋白微球具有较好的孔隙,载威灵仙总皂苷的丝素蛋白微球具有良好的缓释效果;模拟微重力条件下软骨细胞能够自发的黏附于丝素蛋白微球载体;且与空白组比较,模拟微重力培养条件下载威灵仙总皂苷微球软骨细胞增殖率显著增加(P＜0.01),蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、TGF-β、SMAD2表达均显著上调(P＜0.05,P＜0.01).结论:载威灵仙总皂苷丝素蛋白微球载体具有良好缓释效果及细胞相容性,在模拟微重力培养环境下能够使软骨细胞黏附进行良好的黏附扩增,提高软骨细胞增殖活性,上调软骨细胞TGF-β/SMAD2活化水平,促进软骨细胞的基质分泌.
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