【摘 要】
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目的构建铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-LasR，并在大肠埃希菌中研究其表达效率。方法提取铜绿假单胞菌PA01株DNA，PCR扩增lasR基因，并将其与pGEX-1λT连接，构建重组质粒pGEX-LasR。将pGEX-LasR转入大肠埃希菌BL21(DE3)中，筛选阳性克隆，提取质粒进行PCR和双酶切鉴定，然后异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，SDS-PAGE和Western印迹试验分析和鉴定
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016,重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016
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目的构建铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-LasR，并在大肠埃希菌中研究其表达效率。
方法提取铜绿假单胞菌PA01株DNA，PCR扩增lasR基因，并将其与pGEX-1λT连接，构建重组质粒pGEX-LasR。将pGEX-LasR转入大肠埃希菌BL21(DE3)中，筛选阳性克隆，提取质粒进行PCR和双酶切鉴定，然后异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，SDS-PAGE和Western印迹试验分析和鉴定表达产物。
结果PCR扩增出717 bp的lasR基因；双酶切和PCR显示重组质粒构建成功；SDS-PAGE发现重组BL21(DE3)可表达相对分子质量约为53 000的LasR重组蛋白，表达量约占菌体总量的21%。Western印迹试验显示，LasR重组蛋白可与铜绿假单胞菌感染的鼠血清发生特异性反应。
结论本研究成功构建了lasR基因的原核表达载体pGEX-LasR，该质粒可在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效率表达具有免疫反应性的LasR重组蛋白。
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