【摘 要】
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目的从耐药肿瘤组织中进行mdr1 cDNA的全长克隆和pc-MDR1重组质粒的构建.并转hepG2细胞,快速诱导其耐药,并筛选其抗性克隆.方法设计单酶切位点引物,利用长距离逆转录-聚合酶
【机 构】
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浙江温州医学院附属第一医院肝胆外科,王颖,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心
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目的从耐药肿瘤组织中进行mdr1 cDNA的全长克隆和pc-MDR1重组质粒的构建.并转hepG2细胞,快速诱导其耐药,并筛选其抗性克隆.方法设计单酶切位点引物,利用长距离逆转录-聚合酶链反应(Long RT-PCR)技术,hepG2耐药细胞扩增mdr1 cDNA,约3.8kb大小.将其插入至真核表达载体pcDNA3.0质粒中构建pc-MDR1诱导质粒,使其能够在真核细胞中表达P-糖蛋白(P-gp).转hepG2细胞,并用G418筛选出转染的细胞. 结果成功地扩增出3.8kb左右的mdr1 cDNA片段,经酶切鉴定、RT-PCR扩增特异片段和序列测序结果显示质粒构建初步成功,用G418筛选细胞耐药抗性克隆的时间约为14d.结论从耐药肿瘤组织中进行mdr1 cDNA全克隆和pc-MDR1诱导质粒构建的成功为快速诱导细胞耐药和进一步研究肿瘤细胞的耐药机制奠定了基础.
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