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建立了高效液相色谱-串联质谱法检测蜂蜜中红霉素及其代谢物红霉素A烯醇醚和脱水红霉素A的测定方法。以pH 7.0的磷酸盐缓冲液为提取剂，经HLB小柱净化富集后，采用高效液相色谱串联质谱法测定蜂蜜中红霉素及其代谢物的含量。该方法前处理简单，采用内标法定量，方法的线性范围为2.0～100.0 μg/L，相关系数大于0.996，红霉素及其两种主要代谢物的检出限和定量下限分别为0.5 μg/kg和2.0 μg/kg，回收率范围为70.5%-109.2%，RSD小于10%。方法的回收率稳定且重现性较好，可用于蜂蜜中红