【摘 要】
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利用error—prone PCR和staggered extension process（StEP）相结合的方法对扩展青霉脂肪酶（PEL）进行定向进化，构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3．5K—lip—mutantx，电转化引入毕
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No.30270033）,福建省自然科学基金资助项目（C0410009）,福建省科技创新平台建设计划项目（2006H0085）
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利用error—prone PCR和staggered extension process（StEP）相结合的方法对扩展青霉脂肪酶（PEL）进行定向进化，构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3．5K—lip—mutantx，电转化引入毕赤酵母GS115中，进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15％的SDS—PAGE表明突变体分子量与野生型一致，约为28kDa。基因测序结果表明，突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸，后者是氢键的供体，能形成具有稳定空间结构的氢键，使酶结构更
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