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作者单位：610000 成都中医药大学
通讯作者：刘莉
【摘要】 目的 观察不育患者中支原体感染对常规精液分析参数和精子细胞膜渗透性的影响。方法 374例男性不育患者根据精液支原体培养结果分为阳性和阴性两组，比较两组精液参数。结果 两组间常规精液参数无差异。结论 不育男性生殖道支原体感染可能对常规精液分析参数没有明显的影响。
【关键词】 解脲支原体； 男性不育； 精液常规参数
The influence of Ureaplasma urealyticum infection on semen parameters LIU Li， MA Ping，YUE Zong-xiang，et al.Chengdu university of TCM， Chengdu 610000，China
【Abstact】 Objective To observe the influence of Ureaplasma urealyticum(Uu) infection on conventional semen in the infertility patients.Methods Uu culture of semen samples from 374 cases of infertile males were conducted，and routine semen were compared between Uu positive and negative groups.Results No significant difference of the semen parameters between the two groups was observed.Conclusion Uu infection in the male reproductive duct may not influences routine semen parameters.
【Key words】 Ureaplasma urealyticum； Male infertility； Semen analysis
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.06.004
男性不育的流行病学调查显示，男性不育发病率日趋增高，男性泌尿系慢性感染是导致男性不育不容忽视的重要因素之一［1］。生殖道感染可引起患者精液量、精子密度、精子活力、活率明显下降，使精子畸形率明显增高［2］。其中，解脲支原体（UU）慢性感染者由于无明显主观症状，具有临床隐匿性而容易被临床医生和患者忽略。有报道显示，男性不育患者精液中解脲支原体感染率达到40.5%~48.9%［3］，若解脲支原体感染治疗不彻底，可引起睾丸内曲细精管广泛病变，导致生精功能降低并引起精子形态和功能的改变，造成不育。但是，UU影响生育的机制仍不明确，对精子的研究多局限于UU感染的不育患者与健康人之间研究分析，不足以证明UU对精子的作用机理。为探讨UU对精子是否存在负面影响和损伤，笔者对374例不育男性进行了回顾性观察以了解解支原体感染是否对精液分析参数产生影响，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 374例标本来自2008~2011年本校附属第二医院生殖中心就诊的患者，年龄20~46岁，平均33岁，不育时间1~10年，平均3年。不育诊断标准：夫妇同居12个月以上，性生活正常，未采取任何避孕措施，未使女方受孕者。无外伤及遗传性疾病家族史，无性功能障碍病史，体检未发现有明显的睾丸、附睾及输精管异常，无精症患者被排除在外。根据精液UU培养结果不同分为阴性组和阳性组。
1.2 标本采集 受检者禁欲2~7 d，患者取精前排尿，消毒外生殖器及双手，采用手淫法采集精液于无菌杯中。标本采集后，立即置于37 ℃孵箱，待液化后分别进行精子密度、活率、活力及功能检测，同时行解脲支原体培养检测。
1.3 检测指标
1.3.1 精液相关参数分析 包括精子密度（百万/ml）、活力、活动率（前向运动精子、C、D级精子、曲线运动速度、直线运动速度、前向性、直线性、侧向摆动幅度），采用计算机辅助精液分析仪 (CASA，伟力) 分析。
1.3.2 精子形态分析及其他 采用WHO（第4版）精液分析手册推荐的改良巴氏染色方法进行精子涂片染色；镜下观察计数精子≥200个精子/样本，按照WHO标准镜下评判并计算正常精子百分率；用于检测精子存活率的伊红-Y染色方法亦按照WHO（第4版）手册推荐的方法进行。
1.3.3 解脲支原体检测 按照解脲支原体培养试剂盒(珠海迪尔生物工程公司)操作说明书进行操作。无菌取100 μl精液于支原体培养液中，CO2培养箱中培养，每24 hr观察直至接种后72 hr，结果判定。
1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件包对数据进行处理分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
374例不育患者精液标本，检测出UU阳性194例为阳性组，占总标本51.9%；检出UU阴性180例为阴性组，占总标本48.1%。
2.1 精子浓度、存活率、圆细胞、正常精子形态、精子活力比较 解脲支原体阳性组精子浓度、存活率、圆细胞、正常精子形态、精子活力各级（a+b，c，d）与阴性组精子浓度、存活率、圆细胞、正常精子形态、精子活力各级（a+b，c，d）相比较，经统计学分析差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.2 精子运动速度、直线性及运动侧向摆动幅度情况比较 解脲支原体阳性组精子运动速度、直线性及侧向摆动幅度情况与阴性组精子运动速度、直线性及侧向摆动幅度相比较，经统计学分析，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。
3 讨论
目前，我国处于育龄期中大约有3500万夫妇患有不孕不育症，其中，由于男性因素者占55%左右［4］。在影响男性生育功能的众多复杂因素中，慢性生殖道感染最备受关注，尤其是UU感染，有报道发现在男性不育精液中UU阳性检出率达48.7%［5］，本文报道（51.9%）略高于以往报道，可能是因为对象的选择更为严格。
支原体是属于原核细胞型微生物。是一类缺乏细胞壁，呈高度多形性，能通过除菌滤器，属于人体条件致病菌。解脲支原体属于支原体科原体属中的一个种类，在人类生殖道诸多种支原体感染中为最常见的种类。解脲支原体检测被用作为男性生殖道感染和男性不育病因诊断中的一个常规检查项目。但是，支原体感染对男性生育力的影响与否，以及其对男性精子的作用机理一直存在着争议［6，7］。
关于解脲支原体对精子损伤的机理也有探讨。研究证明支原体可附着于精子头部、尾部，改变精子形态［8］，还可以通过诱导机体产生抗精子抗体，使精子发生凝集现象，影响精子活力，干扰精子的运行［9］；支原体代谢产生的有毒物质，如溶神经支原体能产生神经毒素，引起细胞膜损伤；脲原体含有尿素酶，可以水解尿素产生大量氨，对血睾屏障破坏，干扰睾丸曲细精管生精细胞，其产生神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合导致男性生育力下降。研究显示，生殖道支原体感染可能导致生殖细胞凋亡增加［10］，同样报道支原体引起生精细胞凋亡增加的结果也见于动物实验［11］。除此以外UU感染可以导致精浆的活性氧水平异常增加从而引起细胞膜的脂质过氧化和膜流动性降低［12］，从而降低精子的受精功能。
本研究观察了374例不育患者，按照精液支原体培养结果分为阳性和阴性两组，对两组间的精液常规分析指标进行了比较。结果显示，在不育男性患者中，泌尿生殖道解脲支原体感染阳性组与解脲支原体阴性组之间精子浓度、精子存活率、精液中圆细胞计数及正常形态精子百分率、前向运动精子、精子运动参数比较均未见明显差异。对常规精液分析参数的观察结果与国内部分前期报道有所不同［13，14］。但即使在解脲支原体对精液指标产生不利影响的报道中，各家文献中受影响的精子质量指标也存在较大的差异，如Zhang等［15］报道UU可导致精子形态发生改变以及精液中白细胞计数增加，而Wang等［7］观察结果显示出感染者精液粘稠度增高、精液pH降低以及精子浓度降低。Ochsendorf［16］报道生殖道UU感染可能影响精子的活动能力和精子的DNA浓缩。相反，与本观察结果一致，未能观察到脲支原体阳性感染与阴性者之间存在差异的报道也见于诸多文献，Al Sweih等［17］既未观察到生殖道支原体感染率在不育与生育男性之间存在差异，也未观察到感染组与非感染组之间存在精液质量的差异。其他相似的结果见于Günyeli等［18］和Andrade-Rocha等［19］的报道。笔者认为，这些差异的产生可能与观察对象的选择、所用的支原体检测方法，甚至与精液分析结果的准确性等都有关。
本研究在对不育患者支原体感染阳性组和阴性组精液常规参数比较无明显差异。因而，笔者认为，男性生殖道或生殖腺解脲支原体感染究竟对男性生育力的负面影响是否存在，抑或感染对精子的损伤是否表现在常规精液分析参数，值得进一步探讨。严格的临床对象及设立对照可能是获得客观结果的关键。
参 考 文 献
［1］ Fraczek M， Kurpisz M.Inflammatory mediators exert toxic effects of oxidative stress on human spermatozoa［J］.J Androl，2007，28(2)：325.
［2］ Sanocka-Maciejewska D，Ciupiska M，Kurpisz M.Bacterial infection and semen quality［J］.J Reprod Immunol，2005，67(1-2)：51.
［3］ 马雪莲.精液解脲支原体感染对不育的影响［J］.中国优生与遗传杂志，2002（6）：111-112.
［4］ 肖新民，张思孝.男性生殖健康的现状与问题［J］.四川医学，2005，26(2):224-226.
［5］ 邱春红，莫秋柏. 男性不育症与泌尿生殖道解脲支原体感染的关系［J］.临床合理用药，2010；3（14）：100.
［6］ H Zeighami，SN Peerayeh，RS Yazdi，et al.Prevalence of Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum in semen of infertile and healthy men［J］.International Journal of STD and AIDS，2009，20:387-390.
［7］ Wang Y，Liang CL，Wu JQ，et al.Do Ureaplasma urealyticum infections in the genital tract affect semen quality?［J］. Asian J Androl，2006，8(5):562-568.
［8］ 彭少芳，杨志忠，林晓芬，等.消炎系列方治疗解脲支原体感染不育症精子形态的电镜观察［J］.新中医，2004，36(2):19-20.
［9］ 段红艳，章晓梅，任平.抗精子抗体对生育力影响的研究进展［J］.中国男科学杂志，2006，20(5):62-65.
［10］ Shang XJ，Huang YF，Xiong CL，et al.Ureaplasma urealyticum infection and apoptosis of spermatogenic cells［J］.Asian J Androl，1999，1(3):127-129.
［11］ Xu C，Lu MG，Feng JS，et al.Germ cell apoptosis induced by ureaplasma urealyticum infection［J］.Asian J Androl，2001，3(3):199-204.
［12］ Potts JM，Sharma R，Pasqualotto F，et al.Association of ureaplasma urealyticum with abnormal reactive oxygen species levels and absence of leukocytospermia［J］.J Urol，2000，163(6):1775-1778.
［13］ 刘春利，苏玉芬，阮学雨.解脲支原体感染引起不育的检测分析［J］.检验医学与临床，2008；5（2）:78-79.
［14］ 叶玲玲，索永善，曹文丽.解脲支原体感染对精液常规主要参数及精子功能的影响［J］.中国预防医学杂志，2008，9（3）：186-188.
［15］ Zhang ZH，Zhang HG，Dong Y， et al.Ureaplasma urealyticum in male infertility in Jilin Province，North-east China，and its relationship with sperm morphology［J］.J Int Med Res，2011，39(1):33-40.
［16］ Ochsendorf FR.Sexually transmitted infections:impact on male fertility［J］.Andrologia，2008，40(2):72-75.
［17］ Al Sweih NA，Al Fadli AH，Omu AE，et al.Prevalence of Chlamydia trachomatis，Mycoplasma hominis，Mycoplasma genitalium and Ureaplasma urealyticum Infections and Seminal Quality in Infertile and Fertile Men in Kuwait［J］.J Androl，2011，3：78-80.
［18］ Günyeli I，Abike F，Dünder I，et al.Chlamydia，Mycoplasma and Ureaplasma infections in infertile couples and effects of these infections on fertility［J］.Arch Gynecol Obstet，2011，283(2):379-385.
［19］ Andrade-Rocha FT.Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis in men attending for routine semen analysis.Prevalence，incidence by age and clinical settings，influence on sperm characteristics，relationship with the leukocyte count and clinical value［J］.Urol Int，2003，71(4):377-381.
（收稿日期：2012-01-06）
（本文编辑：梅宏伟）
通讯作者：刘莉
【摘要】 目的 观察不育患者中支原体感染对常规精液分析参数和精子细胞膜渗透性的影响。方法 374例男性不育患者根据精液支原体培养结果分为阳性和阴性两组，比较两组精液参数。结果 两组间常规精液参数无差异。结论 不育男性生殖道支原体感染可能对常规精液分析参数没有明显的影响。
【关键词】 解脲支原体； 男性不育； 精液常规参数
The influence of Ureaplasma urealyticum infection on semen parameters LIU Li， MA Ping，YUE Zong-xiang，et al.Chengdu university of TCM， Chengdu 610000，China
【Abstact】 Objective To observe the influence of Ureaplasma urealyticum(Uu) infection on conventional semen in the infertility patients.Methods Uu culture of semen samples from 374 cases of infertile males were conducted，and routine semen were compared between Uu positive and negative groups.Results No significant difference of the semen parameters between the two groups was observed.Conclusion Uu infection in the male reproductive duct may not influences routine semen parameters.
【Key words】 Ureaplasma urealyticum； Male infertility； Semen analysis
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.06.004
男性不育的流行病学调查显示，男性不育发病率日趋增高，男性泌尿系慢性感染是导致男性不育不容忽视的重要因素之一［1］。生殖道感染可引起患者精液量、精子密度、精子活力、活率明显下降，使精子畸形率明显增高［2］。其中，解脲支原体（UU）慢性感染者由于无明显主观症状，具有临床隐匿性而容易被临床医生和患者忽略。有报道显示，男性不育患者精液中解脲支原体感染率达到40.5%~48.9%［3］，若解脲支原体感染治疗不彻底，可引起睾丸内曲细精管广泛病变，导致生精功能降低并引起精子形态和功能的改变，造成不育。但是，UU影响生育的机制仍不明确，对精子的研究多局限于UU感染的不育患者与健康人之间研究分析，不足以证明UU对精子的作用机理。为探讨UU对精子是否存在负面影响和损伤，笔者对374例不育男性进行了回顾性观察以了解解支原体感染是否对精液分析参数产生影响，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 374例标本来自2008~2011年本校附属第二医院生殖中心就诊的患者，年龄20~46岁，平均33岁，不育时间1~10年，平均3年。不育诊断标准：夫妇同居12个月以上，性生活正常，未采取任何避孕措施，未使女方受孕者。无外伤及遗传性疾病家族史，无性功能障碍病史，体检未发现有明显的睾丸、附睾及输精管异常，无精症患者被排除在外。根据精液UU培养结果不同分为阴性组和阳性组。
1.2 标本采集 受检者禁欲2~7 d，患者取精前排尿，消毒外生殖器及双手，采用手淫法采集精液于无菌杯中。标本采集后，立即置于37 ℃孵箱，待液化后分别进行精子密度、活率、活力及功能检测，同时行解脲支原体培养检测。
1.3 检测指标
1.3.1 精液相关参数分析 包括精子密度（百万/ml）、活力、活动率（前向运动精子、C、D级精子、曲线运动速度、直线运动速度、前向性、直线性、侧向摆动幅度），采用计算机辅助精液分析仪 (CASA，伟力) 分析。
1.3.2 精子形态分析及其他 采用WHO（第4版）精液分析手册推荐的改良巴氏染色方法进行精子涂片染色；镜下观察计数精子≥200个精子/样本，按照WHO标准镜下评判并计算正常精子百分率；用于检测精子存活率的伊红-Y染色方法亦按照WHO（第4版）手册推荐的方法进行。
1.3.3 解脲支原体检测 按照解脲支原体培养试剂盒(珠海迪尔生物工程公司)操作说明书进行操作。无菌取100 μl精液于支原体培养液中，CO2培养箱中培养，每24 hr观察直至接种后72 hr，结果判定。
1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件包对数据进行处理分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
374例不育患者精液标本，检测出UU阳性194例为阳性组，占总标本51.9%；检出UU阴性180例为阴性组，占总标本48.1%。
2.1 精子浓度、存活率、圆细胞、正常精子形态、精子活力比较 解脲支原体阳性组精子浓度、存活率、圆细胞、正常精子形态、精子活力各级（a+b，c，d）与阴性组精子浓度、存活率、圆细胞、正常精子形态、精子活力各级（a+b，c，d）相比较，经统计学分析差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.2 精子运动速度、直线性及运动侧向摆动幅度情况比较 解脲支原体阳性组精子运动速度、直线性及侧向摆动幅度情况与阴性组精子运动速度、直线性及侧向摆动幅度相比较，经统计学分析，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。
3 讨论
目前，我国处于育龄期中大约有3500万夫妇患有不孕不育症，其中，由于男性因素者占55%左右［4］。在影响男性生育功能的众多复杂因素中，慢性生殖道感染最备受关注，尤其是UU感染，有报道发现在男性不育精液中UU阳性检出率达48.7%［5］，本文报道（51.9%）略高于以往报道，可能是因为对象的选择更为严格。
支原体是属于原核细胞型微生物。是一类缺乏细胞壁，呈高度多形性，能通过除菌滤器，属于人体条件致病菌。解脲支原体属于支原体科原体属中的一个种类，在人类生殖道诸多种支原体感染中为最常见的种类。解脲支原体检测被用作为男性生殖道感染和男性不育病因诊断中的一个常规检查项目。但是，支原体感染对男性生育力的影响与否，以及其对男性精子的作用机理一直存在着争议［6，7］。
关于解脲支原体对精子损伤的机理也有探讨。研究证明支原体可附着于精子头部、尾部，改变精子形态［8］，还可以通过诱导机体产生抗精子抗体，使精子发生凝集现象，影响精子活力，干扰精子的运行［9］；支原体代谢产生的有毒物质，如溶神经支原体能产生神经毒素，引起细胞膜损伤；脲原体含有尿素酶，可以水解尿素产生大量氨，对血睾屏障破坏，干扰睾丸曲细精管生精细胞，其产生神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合导致男性生育力下降。研究显示，生殖道支原体感染可能导致生殖细胞凋亡增加［10］，同样报道支原体引起生精细胞凋亡增加的结果也见于动物实验［11］。除此以外UU感染可以导致精浆的活性氧水平异常增加从而引起细胞膜的脂质过氧化和膜流动性降低［12］，从而降低精子的受精功能。
本研究观察了374例不育患者，按照精液支原体培养结果分为阳性和阴性两组，对两组间的精液常规分析指标进行了比较。结果显示，在不育男性患者中，泌尿生殖道解脲支原体感染阳性组与解脲支原体阴性组之间精子浓度、精子存活率、精液中圆细胞计数及正常形态精子百分率、前向运动精子、精子运动参数比较均未见明显差异。对常规精液分析参数的观察结果与国内部分前期报道有所不同［13，14］。但即使在解脲支原体对精液指标产生不利影响的报道中，各家文献中受影响的精子质量指标也存在较大的差异，如Zhang等［15］报道UU可导致精子形态发生改变以及精液中白细胞计数增加，而Wang等［7］观察结果显示出感染者精液粘稠度增高、精液pH降低以及精子浓度降低。Ochsendorf［16］报道生殖道UU感染可能影响精子的活动能力和精子的DNA浓缩。相反，与本观察结果一致，未能观察到脲支原体阳性感染与阴性者之间存在差异的报道也见于诸多文献，Al Sweih等［17］既未观察到生殖道支原体感染率在不育与生育男性之间存在差异，也未观察到感染组与非感染组之间存在精液质量的差异。其他相似的结果见于Günyeli等［18］和Andrade-Rocha等［19］的报道。笔者认为，这些差异的产生可能与观察对象的选择、所用的支原体检测方法，甚至与精液分析结果的准确性等都有关。
本研究在对不育患者支原体感染阳性组和阴性组精液常规参数比较无明显差异。因而，笔者认为，男性生殖道或生殖腺解脲支原体感染究竟对男性生育力的负面影响是否存在，抑或感染对精子的损伤是否表现在常规精液分析参数，值得进一步探讨。严格的临床对象及设立对照可能是获得客观结果的关键。
参 考 文 献
［1］ Fraczek M， Kurpisz M.Inflammatory mediators exert toxic effects of oxidative stress on human spermatozoa［J］.J Androl，2007，28(2)：325.
［2］ Sanocka-Maciejewska D，Ciupiska M，Kurpisz M.Bacterial infection and semen quality［J］.J Reprod Immunol，2005，67(1-2)：51.
［3］ 马雪莲.精液解脲支原体感染对不育的影响［J］.中国优生与遗传杂志，2002（6）：111-112.
［4］ 肖新民，张思孝.男性生殖健康的现状与问题［J］.四川医学，2005，26(2):224-226.
［5］ 邱春红，莫秋柏. 男性不育症与泌尿生殖道解脲支原体感染的关系［J］.临床合理用药，2010；3（14）：100.
［6］ H Zeighami，SN Peerayeh，RS Yazdi，et al.Prevalence of Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum in semen of infertile and healthy men［J］.International Journal of STD and AIDS，2009，20:387-390.
［7］ Wang Y，Liang CL，Wu JQ，et al.Do Ureaplasma urealyticum infections in the genital tract affect semen quality?［J］. Asian J Androl，2006，8(5):562-568.
［8］ 彭少芳，杨志忠，林晓芬，等.消炎系列方治疗解脲支原体感染不育症精子形态的电镜观察［J］.新中医，2004，36(2):19-20.
［9］ 段红艳，章晓梅，任平.抗精子抗体对生育力影响的研究进展［J］.中国男科学杂志，2006，20(5):62-65.
［10］ Shang XJ，Huang YF，Xiong CL，et al.Ureaplasma urealyticum infection and apoptosis of spermatogenic cells［J］.Asian J Androl，1999，1(3):127-129.
［11］ Xu C，Lu MG，Feng JS，et al.Germ cell apoptosis induced by ureaplasma urealyticum infection［J］.Asian J Androl，2001，3(3):199-204.
［12］ Potts JM，Sharma R，Pasqualotto F，et al.Association of ureaplasma urealyticum with abnormal reactive oxygen species levels and absence of leukocytospermia［J］.J Urol，2000，163(6):1775-1778.
［13］ 刘春利，苏玉芬，阮学雨.解脲支原体感染引起不育的检测分析［J］.检验医学与临床，2008；5（2）:78-79.
［14］ 叶玲玲，索永善，曹文丽.解脲支原体感染对精液常规主要参数及精子功能的影响［J］.中国预防医学杂志，2008，9（3）：186-188.
［15］ Zhang ZH，Zhang HG，Dong Y， et al.Ureaplasma urealyticum in male infertility in Jilin Province，North-east China，and its relationship with sperm morphology［J］.J Int Med Res，2011，39(1):33-40.
［16］ Ochsendorf FR.Sexually transmitted infections:impact on male fertility［J］.Andrologia，2008，40(2):72-75.
［17］ Al Sweih NA，Al Fadli AH，Omu AE，et al.Prevalence of Chlamydia trachomatis，Mycoplasma hominis，Mycoplasma genitalium and Ureaplasma urealyticum Infections and Seminal Quality in Infertile and Fertile Men in Kuwait［J］.J Androl，2011，3：78-80.
［18］ Günyeli I，Abike F，Dünder I，et al.Chlamydia，Mycoplasma and Ureaplasma infections in infertile couples and effects of these infections on fertility［J］.Arch Gynecol Obstet，2011，283(2):379-385.
［19］ Andrade-Rocha FT.Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis in men attending for routine semen analysis.Prevalence，incidence by age and clinical settings，influence on sperm characteristics，relationship with the leukocyte count and clinical value［J］.Urol Int，2003，71(4):377-381.
（收稿日期：2012-01-06）
（本文编辑：梅宏伟）