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目的 构建shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T细胞并对其体外抗肿瘤活性进行初步研究。方法 构建shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T的CAR分子，包装为逆病毒载体，转导人原代T细胞，制备CAR-T细胞。将2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞作为实验组，未转导的T细胞和CD38 CAR-T细胞作为对照组。采用RT-QPCR法检测CART细胞PTPN2 mRNA抑制效率；计算CAR-T细胞体外培养0～12 d的生长倍数；采用CFSE法检测CAR-T细胞与Raji-luc（人Burkitt淋巴瘤）或RPMI-GFP（人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞）细胞共培养时的增殖情况；采用流式细胞术检测CAR-T细胞表面激活标志物CD69的表达水平；采用流式细胞术和荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比（1∶1、1∶2、1∶4）时对Raji-luc、RPMI-GFP细胞的杀伤效率；采用ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-GFP后上清中干扰素γ（IFN-γ）水平；采用流式细胞术检测CAR-T细胞表面耗竭性T细胞生物标志PD-1的表达水平。结果 CD38 CAR、PTPN2-shRNA1CD38 CAR和PTPN2-shRNA2 CD38 CAR逆病毒载体的滴度均大于1×107copies/ml，转导T细胞后，CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T的转导效率（CAR阳性率）分别为45.4%、60.6%、48.6%。与CD38 CAR-T组相比，2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞PTPN2 mRNA的表达量显著降低（P＜0.01），在2种CD38阳性的肿瘤细胞的刺激下，3组CART细胞的CD69表达明显上升，增殖加快，CAR-T细胞构建成功。2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞杀伤效率更高（P均＜0.01）;γ干扰素的释放水平更高（P均＜0.01）；表面PD-1的表达水平更低（P＜0.01）。结论 本研究成功构建一种shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T细胞，该细胞能够有效地杀伤CD38阳性的多发性骨髓瘤细胞，且与抗CD38 CAR-T细胞相比，抗肿瘤能力更强，改善了CAR-T细胞的耗竭情况。