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建立了测定人尿中异黄酮组分（大豆苷原、黄豆黄素、雌马酚、染料木黄酮）含量的反相高效液相色谱法.在尿样中加入黄酮作为内标,异黄酮经酶解后在pH=7.0中性条件下用乙酸乙酯（1∶ 1）提取,然后用0.02%TFA-MeOH-ACN三元梯度洗脱的方法分离异黄酮.在该条件下,大豆苷原、黄豆黄素、雌马酚、染料木黄酮的检出限分别为12.9 nmol/L、13.9 nmol/L、71.6 nmol/L和11.8 nmol/L;回收率均在89%以上.本方法具有测试步骤简单、准确度高、重现性好等优点,适合大批量样品测定.