【摘 要】
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为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株III型分泌系统(TypeⅢsecretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧
【机 构】
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广东海洋大学深圳研究院,广东深圳 510000广东海洋大学水产学院,广东湛江 524088;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室,广东湛江 52
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为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株III型分泌系统(TypeⅢsecretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列(NO.MN862753),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscQ基因,进行序列分析.结果 显示,该基因全长969bp,预计分子量35.61kDa.将vscQ基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-vscQ.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,能在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白.VscQ蛋白表达的最优条件为:0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h.用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,获得高效多克隆抗体,抗体效价为1:121500.兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特异性反应,表明T3SS C-环组分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一.
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