【摘 要】
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目的 探索E3泛素连接酶S期激酶相关蛋白2(SKP2)介导的碱基切除修复蛋白8-氧代鸟嘌呤-DNA糖基化酶(OGG1)在年龄相关性白内障(ARC)发生过程中的泛素化降解机制.方法 采用免疫沉淀实验检测OGG1的泛素化修饰及其与SKP2的结合能力.采用中波紫外线(UVB)照射人晶状体上皮细胞株SRA01/04构建细胞氧化损伤模型.蛋白免疫印迹实验检测细胞氧化损伤模型和过表达模型细胞中S KP2的蛋白表达.通过转染SKP2质粒,增加SKP2的表达并观察细胞中OGG1蛋白的表达变化.结果 OGG1蛋白存在泛素化
【机 构】
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226001 江苏省南通市,南通大学附属医院眼科
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目的 探索E3泛素连接酶S期激酶相关蛋白2(SKP2)介导的碱基切除修复蛋白8-氧代鸟嘌呤-DNA糖基化酶(OGG1)在年龄相关性白内障(ARC)发生过程中的泛素化降解机制.方法 采用免疫沉淀实验检测OGG1的泛素化修饰及其与SKP2的结合能力.采用中波紫外线(UVB)照射人晶状体上皮细胞株SRA01/04构建细胞氧化损伤模型.蛋白免疫印迹实验检测细胞氧化损伤模型和过表达模型细胞中S KP2的蛋白表达.通过转染SKP2质粒,增加SKP2的表达并观察细胞中OGG1蛋白的表达变化.结果 OGG1蛋白存在泛素化修饰.UbiBrowser软件预测能与OGG1结合的潜在E3泛素连接酶,并通过免疫沉淀实验证明SKP2与OGG1之间存在相互作用.在氧化损伤环境下,SRA01/04细胞中SKP2蛋白表达出现先下降后逐渐升高的趋势,其中UVB照射10 min时SKP2表达下降最为显著.对照组、转染空载质粒组和转染SKP2过表达质粒组SRA01/04细胞中SKP2蛋白的相对表达量分别为1.040±0.007、0.920±0.008和1.330±0.020,与转染空载质粒组相比,转染SKP2过表达质粒组细胞中SKP2蛋白的表达显著上调(P<0.05).空白对照组、UVB组、UVB+转染空载质粒组和UVB+转染SKP2过表达质粒组细胞中OGG1蛋白的相对表达量分别为1.05±0.01、5.05±0.16、5.20±0.07和3.83±0.10;与UVB+转染空载质粒组相比,UVB+转染SKP2过表达质粒组SRA01/04细胞中OGG1蛋白相对表达水平明显降低,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 E3泛素连接酶SKP2能够促进OGG1发生泛素化降解,导致晶状体上皮细胞内部损伤性DNA的累积,从而导致ARC的发生发展.
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