目的建立液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中伏立康唑的浓度并研究其毒性代谢动力学。方法犬血浆样本以乙腈沉淀蛋白后,选用Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（2. 1 mm×50 mm,2. 7μm）,流动相为0. 1%甲酸水与乙腈,流速为0. 3mL·min^-1,柱温为40℃,进样量为10μL,分析时间为5 min;选用Agilent 6460三重四极杆串联质谱仪,离子化方式:电喷雾-正离子（API-ES）,干燥气:N₂,干燥气流速11 L·min^-1,干燥气压力0. 31 MPa,干燥气温度为350℃,毛细管电压4 kV。监测方式:MRM,伏立康唑监测离子对m/z 335. 1/281. 3,氟康唑监测离子对m/z 307. 1/220. 0。30只Beagle犬,静脉输注伏立康唑低、中、高3个剂量组(1、3、6 mg·kg^-1·d^-1),每天静脉输注给药1次,连续给药12周。结果本分析方法专属性良好;伏立康唑在10～10 000 ng·mL^-1内线性关系符合要求;准确度均在85%～115%,精密度RSD在15%内。伏立康唑在比格犬体内雌性暴露量明显高于雄性,当给药1～6 mg·kg^-1·d^-1时,伏立康唑在比格犬体内暴露量随着剂量增加而增大,但二者之间不太符合线性关系,药物基本无蓄积。结论本法经方法学验证,适用于犬血浆中伏立康唑浓度的测定,可用于伏立康唑犬体内毒代动力学研究。