【摘 要】
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为构建抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库,利用Trizol试剂提取BALB/c鼠脾B淋巴细胞RNA,采用RT-PCR两步法扩增BALB/c鼠重链可变区和轻链可变区基因,用重叠延伸PCR技
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室;
【基金项目】
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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(B2F100306)
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为构建抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库,利用Trizol试剂提取BALB/c鼠脾B淋巴细胞RNA,采用RT-PCR两步法扩增BALB/c鼠重链可变区和轻链可变区基因,用重叠延伸PCR技术构建抗口蹄疫病毒scFv基因库;在scFv cDNA双链末端加上EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,形成的双链cDNA两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端;将其与含EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体连接,经体外包装,BLT5403菌株增殖,文库扩增,进行体外亲和筛选。所构建的文库库容量的原始浓度为1×107 PFU/mL,扩增后文库浓度为9.6×1013 PFU/mL。随机挑取50个噬菌斑进行PCR鉴定,均为阳性,大小约800bp。经测序,序列完全正确。结果表明,成功构建了抗口蹄疫病毒单链抗体cDNA T7噬菌体展示文库。
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