目的构建鼠野生型肿瘤坏死因子(Wild type tumor necrosis factor-alpha,wtTNF-α)和跨膜型肿瘤坏死因子(Transmembrane tumor necrosis factor-alpha,tmTNF-α)基因真核表达载体,转染心肌细胞,比较两型TNF-α对心肌细胞凋亡的影响。方法应用RT-PCR方法从小鼠腹腔巨噬细胞中扩增wtTNF-α基因编码区,根据小鼠TNF氨基酸序列设计缺失肿瘤坏死因子转化酶(TNF alpha converting enzyme,TACE)作用位点(缺失1-12位氨基酸)的突变引物,通过重叠PCR得到构建不被TACE剪切的TNF-α突变体,即跨膜型肿瘤坏死因子tm TNF-α,扩增得到的wt TNF-α,tm TNF-αPCR产物经EcoR I+BanH I双酶切后克隆到pIRES2-EGFP真核表达载体中并转染入大鼠H9c2(2-1)心肌细胞,用RT-PCR及Western Blot方法鉴定转染效率及不同表达载体对心肌细胞凋亡的影响。结果成功构建pIRES2-eGFP-wtTNF和pIRES2-eGFP-tmTNF真核表达载体并转染大鼠H9c2(2-1)心肌细胞,tmTNF-α对心肌细胞无明显促凋亡作用,而wtTNF-α可以诱导心肌细胞凋亡。结论由于wtTNF-α可被酶解产生sTNF-α,提示sTNF-α,而并非跨膜型TNF-α对该心肌细胞株具有诱导凋亡的作用。