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目的
构建特异性的大鼠EZH2过表达质粒以及EZH2催化亚基SET domain缺失质粒,并在293T细胞中评估其表达水平。
方法提取大鼠心脏组织RNA,逆转录为cDNA,重叠PCR扩增催化亚基SET domain缺失的EZH2的cDNA,以其为模板进行PCR扩增,将PCR产物和载体双酶切,切胶回收目的片段,经T4连接酶连接,连接产物转入感受态细胞,涂板挑取单克隆摇菌测序,提取质粒,采用脂质体转染法转染293T细胞。
结果Western Blot法和RT-PCR法检测结果表明,质粒在293T细胞中实现EZH2基因的过表达。
结论构建的2种质粒为进一步研究EZH2基因与心肌肥厚的关系及EZH2催化亚基的作用奠定了基础。