【摘 要】
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为开发以转酮醇酶为靶标的新型除草剂，本研究以转酮醇酶为研究对象，通过PCR扩增技术，克隆狗尾草转酮醇酶基因，经酶切，连接等方法构建原核表达载体，琼脂糖凝胶电泳检测蛋白大小符合理论预测数值，经测序验证序列正确。通过原核表达技术获得狗尾草转酮醇酶蛋白，经SDS-PAGE电泳验证蛋白无误。采用pH-based法进行酶活测定，评价不同药剂处理下酶活抑制率，筛选得到RD194、ZBW3、ZBW39、ZBW3
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（31871981）；
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为开发以转酮醇酶为靶标的新型除草剂，本研究以转酮醇酶为研究对象，通过PCR扩增技术，克隆狗尾草转酮醇酶基因，经酶切，连接等方法构建原核表达载体，琼脂糖凝胶电泳检测蛋白大小符合理论预测数值，经测序验证序列正确。通过原核表达技术获得狗尾草转酮醇酶蛋白，经SDS-PAGE电泳验证蛋白无误。采用pH-based法进行酶活测定，评价不同药剂处理下酶活抑制率，筛选得到RD194、ZBW3、ZBW39、ZBW34和ZBW115种药剂，酶活抑制率分别为81.25%、93.75%、81.25%、96.88%和87.50%，优于其它药剂；通过荧光定量PCR实验验证筛选，结果显示，除RD194外，其余4种药剂均使转酮醇酶基因转录水平显著上调，与预期一致。本研究构建了1种快速筛选转酮醇酶潜在抑制剂的方法，为靶向开发新型除草剂奠定重要基础。
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