【摘 要】
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目的:研究艾塞那肽(Ex-4)对成年小鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)分化的影响及机制.方法:提取5周龄C57BL/6J小鼠SVZ的NSCs,100 nmol/L Ex-4处理分化14 d观察细胞形态,用免
【机 构】
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锦州医科大学研究生院,辽宁 锦州 121000武警特色医学中心脑科中心,武警部队脑创伤与神经疾病研究所,天津市神经创伤修复重点实验室,天津 300162;武警特色医学中心脑科中心,武警部队脑创伤与神经
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目的:研究艾塞那肽(Ex-4)对成年小鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)分化的影响及机制.方法:提取5周龄C57BL/6J小鼠SVZ的NSCs,100 nmol/L Ex-4处理分化14 d观察细胞形态,用免疫荧光检测巢蛋白(nestin)和胰高糖素样肽-1受体(GLP-1R)的表达.用shRNA敲低GLP-1R,将研究分为四组:对照组,Ex-4组,GLP-1R敲低组,GLP-1R敲低+Ex-4组.100 nmol/L Ex-4处理14 d后免疫荧光标记 β-微管蛋白3(β-tublin III)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)并统计 β-tublin III阳性细胞比例,Western blot检测环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的活化.为进一步研究Ex-4对MAPK和PI3K通路的影响,分别以丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂U01260.07μmol/L预处理细胞30 min、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY29400250μmol/预处理细胞2 h,将研究分为:对照组,Ex-4组,U0126组,U0126+Ex-4组,LY294002组,LY294002+Ex-4组,Western blot检测各组CREB的活化,各组实验独立重复三次.结果:成功从C57BL/6J小鼠SVZ提取NSCs,免疫荧光提示NSCs中nestin以及GLP-1R阳性.相对于对照组,Ex-4组分化为神经元的比例更高.GLP-1R敲低+Ex-4组中神经元比例与对照组基本一致(P<0.01),β-tublin III阳性的细胞显示出GLP-1R以及CREB活化阳性.Western blot显示Ex-4组中CREB显著活化,GLP-1R敲低+Ex-4组的CERB活化与对照组基本一致(P<0.01).U0126+Ex-4组与Ex-4组CERB活化水平一致,LY294002+Ex-4组与对照组CERB活化水平一致(P<0.01).结论:Ex-4通过GLP-1R受体促进成年小鼠SVZ中NSCs分化为神经元,这一作用可能通过PI3K/CREB通路来实现.
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