目的构建靶向雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的RNA干扰表达载体,观察其对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖活性的影响。方法根据大鼠mTOR基因序列设计2个短发夹环RNA （shRNA）序列,化学法合成单链寡核苷酸序列,将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN,脂质体介导转染包装细胞PT67后获得mTOR的重组逆转录病毒shRNA表达载体,感染VSMC,Northern blot和Western blot法检测mTOR及其下游底物真核细胞启动子4E结合蛋白（4E-BP1）、p70s6k等表达的变化,流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化,噻唑蓝（MTT）法检测VSMC增殖活性的改变。结果shRNA序列插入pLXIN载体并感染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR的mRNA和蛋白产物表达,mTOR通路下游的核糖体蛋白S6激酶（p70s6k）表达相应减少,而4E-BP1的表达却显著增强；感染前VSMC细胞G₁/G₀,期比例为71%,S期为15%,凋亡细胞为2%；转染后72 h,G₁/ G₀期比例为87%,S期为6%,凋亡细胞为6%（P＜0．01）；表明G₀/G₁μ→S过程受阻,VSMC的分裂、增殖受到抑制,凋亡机制启动,更多细胞停滞在G₀/G₁期。结论成功构建靶向mTOR基因的shRNA表达载体,能够明显抑制VSMC分裂、分化和增殖。