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采用硅胶层析法对自制的聚乙二醇1 000 VE琥珀酸酯（TPGS）进行分离纯化,考察了柱温、上样量、上样浓度和流量等因素对TPGS分离效果的影响,优选出TPGS分离的工艺条件,并对其进行了验证。结果表明：随着柱温、上样量或流量的增加,TPGS分离纯度和回收率均表现为＂先增后降＂趋势;TPGS分离适宜工艺条件为40℃柱温、4 g上样量、0.3 g/mL上样浓度和3 mL/min流量,在此条件下,TPGS分离的平均纯度和回收率可达93.13%和97.72%。