【摘 要】
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【目的】以单增李斯特菌Lmo1903为研究对象，研究其在细菌环境适应过程中的抗氧化应激生物学作用。【方法】使用生物信息学方法分析Lmo1903的进化关系和关键活性位点，使用酶切连接的方法构建Lmo1903蛋白表达载体，获得纯化的重组蛋白，以胰岛素为底物分析其氧化还原酶学活性；同时制备鼠源多克隆抗体，分析其在细胞内的定位；采用核苷酸定点突变技术构建CX1X2C基序中的半胱氨酸点突变蛋白，分析关键位点
【机 构】
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浙江农林大学动物科技学院.动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（31902280，31972648）； 宁波市自然科学基金（202003N4179）； 浙江省大学生科研训练项目（2021KX0120）；
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【目的】以单增李斯特菌Lmo1903为研究对象，研究其在细菌环境适应过程中的抗氧化应激生物学作用。【方法】使用生物信息学方法分析Lmo1903的进化关系和关键活性位点，使用酶切连接的方法构建Lmo1903蛋白表达载体，获得纯化的重组蛋白，以胰岛素为底物分析其氧化还原酶学活性；同时制备鼠源多克隆抗体，分析其在细胞内的定位；采用核苷酸定点突变技术构建CX1X2C基序中的半胱氨酸点突变蛋白，分析关键位点半胱氨酸对Lmo1903酶活的影响；采用同源重组原理构建lmo1903基因缺失株Δlmo1903和回补株CΔlmo1903，研究lmo1903在单增李斯特菌生长、运动和抗氧化应激方面发挥的功能。【结果】生物信息学分析显示Lmo1903含有CX1X2C基序，与枯草芽孢杆菌的TrxA的亲缘关系较近，属于硫氧还蛋白家族成员，主要定位在细菌细胞质中，具有较强的还原酶学活性，突变CX1X2C基序中的半胱氨酸残基会显著降低Lmo1903的还原酶活能力。缺失lmo1903不影响单增李斯特菌的生长能力，但显著减弱了细菌在铜离子胁迫环境中的氧化应激耐受能力，且影响鞭毛合成相关因子的转录水平和细菌的运动能力。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌硫氧还蛋白Lmo1903具有还原酶学活性，介导细菌运动和对氧化环境的适应。
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