【摘 要】
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目的:构建人IL-1Ra和人IL-10真核表达质粒载体并检测其表达.方法:用双酶切方法切取PCDI-IL-1Ra和PCDI-IL-10质粒中包含人IL-1Ra和人IL-10 CDS全长序列的cDNA片段,并分别连接
【机 构】
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北京大学第三医院运动医学研究所,北京,100083;北京大学医学部生物化学与分子生物学系
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目的:构建人IL-1Ra和人IL-10真核表达质粒载体并检测其表达.方法:用双酶切方法切取PCDI-IL-1Ra和PCDI-IL-10质粒中包含人IL-1Ra和人IL-10 CDS全长序列的cDNA片段,并分别连接到真核表达质粒pcDNA3.1上,然后用壳聚糖转染上述质粒到原代软骨细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达.结果:成功将人IL-1Ra和IL-10 CDS全长序列的cDNA片段克隆到真核表达载体,mRNA水平检测到目的基因的表达明显提高.结论:真核表达质粒可以用于外源基因的原代软骨细胞导入和表达,为进一步的基因治疗研究提供依据.
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