【摘 要】
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目的 观察重组转化生长因子β1(TGFβ1)和β3(TGFB3)基因对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科
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目的 观察重组转化生长因子β1(TGFβ1)和β3(TGFB3)基因对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响.方法 (1)构建质粒pcDNA3.1(+)-TGFB,和peDNA3.1(+)-TGFβ3;(2)瞬时转染:将pcDNA3.1(+)-TGFβ1和peDNA3.1(+)-TGFβ3分别及共同转染HSC-T6细胞,荧光定量PCR法和免疫印迹法检测转染后24、48和72 h时MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达;(3)稳定转染:pcDNA3.1(+)-TGFβ1转染HSC-T6细胞,经筛选建立高表达TGFβ1的HSC-T6细胞克隆,pcDNA3.1(+)-TIGFβ3转染细胞克隆,48 h后检测MMP-2、MMP-9和T1MP-1的表达.结果 (1)TGFβ1转染细胞后,MMP-2和TIMP-1明显增高(P＜0.05),MMP-9无变化;TGFβ3转染细胞后,MMP-2和MMP-9无变化,TIMP-1 mRNA也无变化,但TIMP-1蛋白明显增高(P＜0.05);共转染组的MMP-2较空白组和对照组明显增加(P＜0.05),MMP-9无改变,TIMP-1较TGFβ1转染组明显下降(P＜0.05).(2)TGFβ3转染克隆细胞后,MMP-2无明显变化,MMP-9明显增加(P＜0.05),TIMP-1明显下降(P＜0.05).结论 重组TGFβ3基因可能通过促进MMP-2或MMP-9的活性和抑制TIMP-l的活性而发挥抗肝纤维化作用.
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