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对有机相脂肪酶催化合成柠檬酸甘油酯的工艺条件进行了优化。在单因素试验的基础上，根据Box—Benhnken试验设计原理，采用三因素三水平的响应面分析法，研究了催化剂用量、反应温度和反应时间及其交互作用对柠檬酸转化率的影响。确定最佳工艺参数为：在无水叔丁醇中，脂肪酶Novozym435用量9．02％，54．18℃反应47．5h。最佳条件下柠檬酸转化率可达77．37％。反应产物经薄层色谱分离和电喷雾质谱分析，主要为柠檬酸单脂肪酸甘油酯和单柠檬酸甘油酯。