论文部分内容阅读
目的研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸（Hcy）诱导的脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的作用及机制。方法以补阳还五汤连续灌胃SD大鼠1周,提取补阳还五汤含药血清。将HUVEC置于5%CO2、37℃细胞恒温培养箱中培养,当细胞汇合度达到80%,选取对数期细胞,开始分组与模型制备。将HUVEC随机分为10组:空白组（10%空白血清）、模型组（10%空白血清+Hcy）、小中大3个百分含量实验组（5%,10%,20%补阳还五汤）、模型组-Ⅰ（10%胎牛血清+Hcy）、抑制剂-Ⅰ组(10μmol·L-1MAPK抑制剂SB203580+Hcy)、抑制剂-Ⅱ组(10μmol·L-1ERK抑制剂PD98059+Hcy)、抑制剂-Ⅲ组(10μmol·L-1Rho激酶抑制剂Y27632+Hcy)、抑制剂-Ⅳ组(10μmol·L-1MLCK抑制剂ML-7+Hcy),且Hcy造模浓度为3 mmol·L-1。用噻唑蓝（MTT）测定Hcy对HUVEC的毒性作用;用蛋白质印迹法测定丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）蛋白的表达量;用MillicellERS电阻仪测定各组单层细胞跨膜电阻值（TEER）的变化。结果与空白组的光密度值（代表细胞增值）为0.95±0.05比较,7个Hcy梯度组的光密度值分别是0.91±0.06,0.88±0.08,0.68±0.06,0.60±0.07,0.58±0.04,0.51+0.06,0.40+0.02,差异有统计学意义（P<0.05）。P38MAPK蛋白的相对表达量:空白组、模型组、小中大3个百分含量实验组、模型对照组（即模型-Ⅰ组）及4个抑制剂组分别是0.42±0.06,1.10±0.12,0.33±0.03,0.68±0.08,0.46±0.04,0.42±0.03,0.37±0.04,0.48±0.05,0.32±0.02,0.63±0.08。磷酸化P38MAPK蛋白相对表达量以上各组分别是0.12±0.01,0.42±0.04,0.40±0.05,0.18±0.02,0.20±0.01,0.22±0.02,0.18±0.02,0.30±0.03,0.17±0.01,0.19±0.02。与空白组比较,模型组的P38MAPK、磷酸化P38MAPK表达量显著增加,差异有明显统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中高2个百分含量实验组和抑制剂组,磷酸化P38MAPK蛋白相对表达量表达显著下降,差异有明显统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,小百分含量实验组的P38MAPK显著下降,差异有统计学意义（P<0.01）。磷酸化ERK1/2蛋白相对表达量:空白组、模型组、小中大3个百分含量实验组、模型对照组（即模型-Ⅰ组）及2个抑制剂组分别是0.69±0.03,0.95±0.05,0.41±0.02,0.50±0.03,0.51±0.04,0.91±0.03,0.80±0.02,0.69±0.03。与空白组比较,模型组的Pho-ERK1/2蛋白表达量显著增加,差异有明显统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,小中高3个百分含量实验组的Pho-ERK1/2蛋白表达显著下降,差异有明显统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,抑制剂-Ⅰ、抑制剂-Ⅱ组的Pho-ERK1/2蛋白显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。ERK1/2蛋白相对表达量各组依次是0.55,0.60,0.59,0.58,0.58,0.59,0.60,0.60,与模型组比较,各组差异无统计学意义（P>0.05）。HUVEC细胞单层跨膜电阻值（TEER）:空白组、模型组、小中大3个百分含量实验组、模型对照组（即模型-Ⅰ组）及4个抑制剂组依次是（60.48±1.61）,（13.44±0.95）,（40.32±0.92）,（41.44±0.89）,（36.96±1.59）,（13.44±1.36）,（24.64±1.32）,（30.24±1.67）,（24.64±0.72）,（23.52±0.74）Ω·cm-2。与空白组比较,模型组的内皮细胞TEER值显著降低,差异有明显统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,小中高3个百分含量实验组、抑制剂组的TEER值显著上升,差异有明显统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,模型-Ⅰ组差异无统计学意义（P>0.05）。结论补阳还五汤通过调节内皮细胞P38MAPK、ERK1/2蛋白通路,减少细胞骨架的变化,阻止细胞通透性变大,从而发挥抗内皮细胞损伤作用。