【摘 要】
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[目的]探究微小RNA(microRNA,miR)-216a靶向调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus protein tyrosine protein kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、自噬及血管生成的影响.[方法] Target Scan Human预测miR-216a与JAK2的结合位点,双荧光素酶实验验证miR-216a与JAK2是否结合;
【机 构】
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宁德师范学院附属宁德市医院,福建宁德352100
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[目的]探究微小RNA(microRNA,miR)-216a靶向调控酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus protein tyrosine protein kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、自噬及血管生成的影响.[方法] Target Scan Human预测miR-216a与JAK2的结合位点,双荧光素酶实验验证miR-216a与JAK2是否结合;免疫组化染色检测正常鼻咽黏膜组织、鼻咽癌组织标本p-JAK2、p-STAT3的表达水平,并分析p-JAK2、p-STAT3表达水平与患者临床病理参数的关系.采用LipofectamineTM3000将miR-216a模拟物双链小RNA、阴性对照双链小RNA转染至CNE-2细胞构建过表达miR-216a细胞系,细胞分为对照组、miR-NC组、miR-216a组.将抑制剂双链小RNA,抑制剂对照双链小RNA转染至CNE-2细胞构建低表达miR-216a细胞系,细胞分为对照组、抑制miR-NC组、抑制miR-216a组.采用qRT-PCR检测细胞JAK2、STAT3 mRNA表达水平;MTT法、Transwell小室、皮下种植瘤模型、小管形成实验、吖啶橙染色分别检测细胞增殖、侵袭、移植瘤生长、血管形成和自噬泡形成的能力;Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,CL3-Ⅱ)、酵母自噬相关基因6的哺乳动物同源体(autophagy related protein ATG6,Beclin1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达水平.[结果]双荧光素酶实验验证了miR-216a对JAK2的靶向调控作用.鼻咽癌组织p-JAK2、p-STAT3阳性表达率(75.0％,68.3％)明显高于正常鼻咽黏膜组织(10％,13.3％)(P＜0.05).p-JAK2、p-STAT3表达越高,浸润深度越严重,越容易发生淋巴结和远处转移(P均＜0.05).细胞实验显示:与miR-NC组相比,miR-216a组细胞24、48、72、96 h吸光度值(0.32±0.03 vs 0.15±0.04、0.58±0.07 vs 0.24±0.06、0.86±0.10 vs 0.41±0.06、1.48±0.11 vs 0.75±0.07)、细胞侵袭数目(101.00±11.00 vs 22.67±5.77)、血管形成数目(127.53±10.61 vs 74.36±8.48)明显降低,移植瘤体积[(1545.21±70.71)mm3 vs (485.24±91.92)mm3)]减小,JAK2、p-JAK2、p-STAT3、VEGF蛋白表达量(1.85±0.07 vs 0.93±0.11、1.03±0.07 vs 0.32±0.05、0.92±0.09 vs 0.44±0.08、1.17±0.05 vs 0.55±0.07)明显减少(P均＜0.05);细胞自噬能力、Beclin1、CL3-Ⅱ蛋白表达量(0.30±0.08 vs 1.03±0.11、0.38±0.04 vs 1.00±0.08)均显著性升高(P＜0.05).与抑制miR-NC组相比,抑制miR-216a组JAK2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达量(1.35±0.07 vs 1.93±0.11、0.55±0.07 vs 1.28±0.11、0.45±0.07 vs 1.23±0.11)明显升高(P均＜0.05).[结论]JAK2、STAT3在鼻咽癌组织及细胞中表达量升高且发挥促癌作用,其作用机制可能是miR-216a通过靶向调控JAK2/STAT3信号通路,提高了细胞自噬水平,抑制了增殖、迁移和血管形成能力,对鼻咽癌患者的治疗和预后具有指导意义.
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