目的:探讨ISL-1和Tbx18联合转染对乳鼠心室肌细胞重编程的作用,及能否在体外构建生物起搏点。方法:将乳鼠心室肌细胞随机分成空白对照组、GFP组、ISL-1组、Tbx18组、ISL-1+Tbx18组,分别转染相应病毒,培养5～7 d后qRT-PCR、Western blot和免疫荧光检测超极化激活环核苷酸门控离子通道蛋白亚型4(HCN4)的表达情况,观察细胞形态和搏动频率变化,并用膜片钳技术记录细胞内电流活动。结果:ISL-1组、Tbx18组和ISL-1+Tbx18组的细胞搏动频率和HCN4的mRNA和蛋白表达水平较空白对照组和GFP组明显升高,其中ISL-1+Tbx18组的细胞搏动频率和HCN4的mRNA和蛋白表达水平明显高于ISL-1组和Tbx18组(P均<0.05)。通过免疫荧光技术,ISL-1组和Tbx18组可检测到HCN4不连续表达,ISL-1+Tbx18组HCN4连续高表达。通过膜片钳技术,ISL-1组和Tbx18组均仅有少数细胞可记录到起搏电流活动,而ISL-1+Tbx18组大多数细胞可记录到起搏电流活动。结论:ISL-1和Tbx18联合表达能提高乳鼠心室肌细胞重编程为起搏样细胞的效率。