【摘 要】
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目的 探讨转录因子SOX9对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)成软骨细胞分化潜能的影响.方法 分离培养鉴定hUC-MSCs,SOX9慢病毒载体转染hUC-MSCs后检测转染效率,MTT法检测细胞增殖.SOX9转染后软骨诱导培养21 d,观察细胞形态变化,逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验、免疫荧光、阿利新兰染色进行软骨分化评价,并检测Ⅰ、Ⅹ型胶原以及细胞黏附分子N-cadherin的表达.结果
【机 构】
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215131江苏省苏州市相城人民医院骨科,苏州大学附属第一医院骨科,215131江苏省苏州市相城人民医院骨科,苏州大学附属第一医院骨科,苏州大学附属第一医院骨科,苏州大学附属第一医院骨科,苏州大学附属
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目的 探讨转录因子SOX9对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)成软骨细胞分化潜能的影响.方法 分离培养鉴定hUC-MSCs,SOX9慢病毒载体转染hUC-MSCs后检测转染效率,MTT法检测细胞增殖.SOX9转染后软骨诱导培养21 d,观察细胞形态变化,逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验、免疫荧光、阿利新兰染色进行软骨分化评价,并检测Ⅰ、Ⅹ型胶原以及细胞黏附分子N-cadherin的表达.结果 培养的hUC-MSCs经流式细胞仪检测示CD29( 95.9％),CD44( 96.5％),CD90 (98.9％),CD105 (94.3％)阳性,CD34(3.0％),CD45 (2.6％)阴性,有成骨及成脂分化能力.转染48 h后观察到绿色免疫荧光蛋白(GFP)表达,转染效率＞90％,P＞0.05;基因转染对hUC-MSCs的增殖无明显影响.Lenti-GFP-SOX9转染的hUC-MSCs在单层培养下出现自发性细胞聚集,并形成较大的软骨结节.SOX9明显上调了N-cadherin的表达,促进hUC-MSCs产生聚集,增加Ⅱ型胶原、Aggrecan的表达水平,抑制了Ⅰ、Ⅹ型胶原的表达.结论 SOX9促进人脐带间充质干细胞聚集增强其向软骨分化的潜能。
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