【摘 要】
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目的 建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA).方法 根据副溶血性弧菌dh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法.通过检测不
【机 构】
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浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州,310051
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目的 建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA).方法 根据副溶血性弧菌dh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法.通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果.结果 建立的实时RPA方法在39℃恒温下20 main内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5 pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB 4789.7-2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》检测结果一致.结论 建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测.
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