【摘 要】
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目的 探讨铁对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨样细胞分化过程的影响及核因子κB（nuclear factor kappa-B, NF-κB）信号通路在其中的作用。方法 RAW264.7细胞以400μmol/L枸橼酸铁铵（ferric ammonium citrate, FAC）干预，以NF-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-kappa
【机 构】
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苏州大学附属第二医院骨科骨质疏松症临床中心苏州大学骨质疏松诊疗技术研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金（82003473）； 苏州市科技计划项目（KJXW201815）； 院科研预研基金项目（SDFEYBS1810）；
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目的 探讨铁对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨样细胞分化过程的影响及核因子κB（nuclear factor kappa-B, NF-κB）信号通路在其中的作用。方法 RAW264.7细胞以400μmol/L枸橼酸铁铵（ferric ammonium citrate, FAC）干预，以NF-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand, RANKL）诱导向破骨样细胞分化，分化能力采用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid acid phosphatase, TRAP）染色及噬骨陷窝实验检测。应用RNA-Seq对FAC组与对照组细胞进行转录组测序，并在此基础上分析差异表达基因，通过基因本体（gene ontology, GO）分析、京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）通路分析对差异基因进行注释。采用凝胶电泳迁移率实验（electrophoretic mobility shift assay, EMSA）验证NF-κB胞核内结合情况，并通过抑制NF-κB信号通路，研究该通路在其中的作用。结果 铁干预后，TRAP阳性染色细胞增多（P＜0.01）、噬骨陷窝范围扩大；FAC组与对照组共有994个差异表达基因，其中上调基因520个，下调基因474个。GO分析结果显示，差异基因的功能集中表现在生物学过程蛋白修饰过程的正调控、细胞黏附、酶抑制剂活性等。KEGG通路分析发现差异表达mRNA多富集于NF-κB通路。EMSA结果提示，高铁环境下，细胞NF-κB通路激活。将NF-κB通路抑制后，FAC对破骨细胞的分化作用减弱。结论 铁蓄积可能通过激活NF-κB信号通路，刺激破骨细胞分化过程。
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